细胞外基质相关蛋白表皮生长因子和肌腱蛋白在仿刺参再生过程中的表达分析

发布时间：2017-04-30 10:15

  本文关键词：细胞外基质相关蛋白表皮生长因子和肌腱蛋白在仿刺参再生过程中的表达分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：海参有很强的再生能力,目前可以确定许多重要基因与再生过程的分子机制以及细胞间的信号通路相关。Fibropellin-ia基因的产物形成复杂的纤维状结构且与其他透明层的组件一起构成细胞粘附的胞外基质。透明层是一个复杂的网状结构,在胚胎发育的整个过程中都覆盖在海参胚胎的周围,在胚胎发育的某些特定时期,细胞可以在透明层上面进行附着和迁移。Tenascin蛋白表达在胚胎发育过程中以及成体正常组织的伤口愈合,神经再生等过程,且肿瘤组织细胞中也有明显的表达。在本研究中,我们首次克隆了仿刺参中fibropellin-ia和tenascin的全长cDNA,实验结果显示日本仿刺参fibropellin-ia(Aj-fnia)cDNA全长1390个碱基,编码199个氨基酸、tenascin(Aj-tenascin)为1366个碱基,编码179个氨基酸。通过生物信息学方法分析了这两个基因的结构和特点。通过实时荧光定量PCR和原位杂交(ISH)技术分析了仿刺参再生过程中的细胞外基质重塑的过程中这两个基因的表达模式。结果发现,Aj-fnia和Aj-tenascin在再生组织的表达水平高于正常组织。在仿刺参进行吐脏处理后,Aj-fnia和Aj-tenascin在肠道和呼吸道的最高表达水平分别出现在第15日和20日。在体壁早期的再生阶段,Aj-fnia和Aj-tenascin的最高表达水平出现在35分钟和45分钟,随后,表达量均有所下降,然后在5至7 d再次出现表达量的峰值。原位杂交技术分析Aj-fnia和Aj-tenascin基因在仿刺参体内的体壁、纵肌、肠道和呼吸道树中的表达部位的时发现:在体壁的表皮、真皮和结缔组织中,肠道的黏膜和黏膜下层,呼吸树的粘膜细胞及末端的一层或多层鳞状上皮细胞中目的基因表达较多。所有上述这些发现均表明:Aj-fnia和Aj-tenascin在海参的再生过程中扮演了十分重要角色,是刺参再生的重要相关基因。
【关键词】：仿刺参 细胞外基质相关 Fibropellin-ia(Aj-fnia)基因 Tenascin(Aj-tenascin)基因 表达模式
【学位授予单位】：辽宁师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S917.4
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 1 前言9-20
• 1.1 仿刺参的分类、形态特点9-11
• 1.1.1 仿刺参的分类和形态特征9
• 1.1.2 仿刺参的生活习性9-10
• 1.1.3 仿刺参的药用和营养价值10
• 1.1.4 仿刺参的特殊生理特点10-11
• 1.2 仿刺参各组织器官的再生11-15
• 1.2.1 仿刺参吐脏后消化道的再生11-12
• 1.2.2 仿刺参吐脏后呼吸树的再生12-13
• 1.2.3 仿刺参体壁创伤后的再生13
• 1.2.4 仿刺参创伤后纵肌带的再生13-14
• 1.2.5 探究仿刺参再生的原理和机制14-15
• 1.3 细胞外基质—ECM15
• 1.4 Fibropellin-ia15-16
• 1.4.1 基因的家族成员介绍15
• 1.4.2 基因的结构和功能15-16
• 1.5 Tenascin16-19
• 1.5.1. 基因的家族成员介绍16-18
• 1.5.2. 基因的结构和功能18-19
• 1.6 实验的目的及探究的意义19-20
• 2 材料和方法20-36
• 2.1 材料20-25
• 2.1.1 实验材料20
• 2.1.2 主要试剂及药品20-24
• 2.1.3 仪器与设备24-25
• 2.2 方法25-36
• 2.2.1 提取仿刺参总RNA25
• 2.2.2 获取基因全长序列25-32
• 2.2.3 原位杂交32-35
• 2.2.4 荧光实时定量PCR35-36
• 3 结果36-51
• 3.1 基因全长的克隆36-42
• 3.1.1 Aj-fnia、Aj-tenascin基因EST片段36-37
• 3.1.2 Aj-fnia、Aj-tenascin基因 3’RACE片段37-38
• 3.1.3 Aj-fnia、Aj-tenascin基因 5’RACE片段38-39
• 3.1.4 Aj-fnia、Aj-tenascin基因全长序列39-42
• 3.2 生物信息学分析42-47
• 3.3 Aj-fnia和Aj-tenascin的表达部位47-49
• 3.4 实时荧光定量PCR检测Aj-fnia和Aj-tenascin的转录表达水平49-51
• 4 讨论51-54
• 4.1 Aj-fnia、Aj-tenascin基因结构和功能51-52
• 4.2 Aj-fnia、Aj-tenascin基因在仿刺参中表达部位的情况52
• 4.3 Aj-fnia、Aj-tenascin基因在各阶段再生组织中的表达模式52-54
• 结论54-55
• 参考文献55-62
• 攻读硕士学位期间发表学术论文情况62-63
• 致谢63

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本文编号：336676