龙眼SVP基因的克隆及功能研究

发布时间：2017-05-10 21:08

  本文关键词：龙眼SVP基因的克隆及功能研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：本试验以‘四季蜜’、‘立冬本’龙眼嫁接新梢及‘红核子’龙眼叶芽为材料,研究不同龙眼品种中SVP同源基因序列的差异(包括基因序列的可变剪切)及表达差异,探究龙眼SVP同源基因在龙眼的成花调控网络中(包括花芽分化和幼年期调控)的作用。本试验主要获得了以下研究结果：1.荧光定量PCR验证龙眼13个成花调控基因在‘四季蜜’和‘立冬本’嫁接新梢中表达的差异。结果表明,GI与FKF1基因在‘四季蜜’中均表达升高,SVP、 FLC、 EMF2的同源基因在‘四季蜜’中表达降低。龙眼中的TFL1同源基因TFL1(6O27)与TFL1(6475)变化趋势不同,TFL1(6027)在‘四季蜜’中的表达稍高于‘立冬本’,而TFL1(6475)在‘四季蜜’中表达降低。LFY、AP1与SOC1基因在两个品种中的表达差异不明显。2.以‘四季蜜’龙眼嫁接新梢及‘红核子’龙眼叶芽为试验材料,克隆龙眼中的SVP同源基因,得到‘四季蜜’龙眼中SVP645基因的7个不同拷贝序列、SVP2719的7个可变剪切序列,‘红核子’龙眼中SVP645基因的7个不同拷贝序列、SVP2719的4个可变剪切序列。分析各序列,发现龙眼SVP645基因的大多数拷贝在‘红核子’和‘四季蜜’中序列存在差异；SVP2719基因在‘四季蜜’和‘红核子’中的碱基序列基本无差异,编码区氨基酸序列完全一致。3.荧光定量PCR分析两个龙眼SVP同源基因在‘红核子’品种中花芽分化过程的表达。结果显示,在1月份龙眼花芽开始形态分化的时候,SVP645基因的表达达到顶峰,而SVP2719基因表达却开始下降,表明SVP645与SVP2719基因可能具有不同的功能,SVP2719功能可能与抑制花芽分化有关。4.选择‘四季蜜’中SVP2719的S-1和S-6号基因序列构建重组表达载体,根癌农杆菌介导转化本氏烟草。结果发现龙眼SVP2719-S1基因使烟草的花蕾形状发生了变化,花蕾畸形,不能正常成花；SVP2719-S6基因使烟草的花朵形状发生了变化,花瓣畸形,但花瓣数、萼片、雌蕊、雄蕊无变化。
【关键词】：龙眼 SVP基因 可变剪切 多拷贝 基因表达
【学位授予单位】：福建农林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S667.2
【目录】：

• 摘要9-10
• Abstract10-12
• 缩写词12-13
• 第一章 前言13-23
• 1. 木本植物成花的影响因素14-17
• 1.1 木本植物成花的环境调控14-16
• 1.1.1 低温15
• 1.1.2 水分15
• 1.1.3 光照15
• 1.1.4 生产措施15-16
• 1.2 营养生长与生殖生长16
• 1.3 木本植物成花的分子调控16-17
• 2. 木本植物成花基因研究进展17-21
• 2.1 CO基因17-18
• 2.2 FLC基因18-19
• 2.3 FT与TFL1基因19-20
• 2.4 花分生组织特性基因LFY、AP1和SOC120-21
• 3. 植物SVP基因研究进展21-22
• 4. 本研究的目的和意义22-23
• 第二章 龙眼成花调控基因的表达23-35
• 1. 试验材料23
• 1.1 植物材料23
• 1.2 主要试剂23
• 1.3 主要仪器23
• 2. 试验方法23-28
• 2.1 总RNA的提取及纯化23-25
• 2.1.1 总RNA的提取23-24
• 2.1.2 RNA的检测24
• 2.1.3 RNA的纯化24-25
• 2.2 cDNA合成25
• 2.3 龙眼开花途径相关基因的引物设计25-27
• 2.4 荧光定量PCR反应27-28
• 3. 结果与分析28-33
• 3.1 RNA质量检测28
• 3.2 绘制标准曲线28-30
• 3.3 13个成花调控基因在‘立冬本’和‘四季蜜’嫁接新梢中的表达30-33
• 4. 讨论33-35
• 第三章 龙眼SVP基因的克隆与表达分析35-55
• 1. 试验材料35-36
• 1.1 植物材料35
• 1.2 主要试剂35
• 1.3 感受态和克隆载体35-36
• 1.4 引物合成及测序36
• 1.5 试验仪器36
• 2. 试验方法36-39
• 2.1 ‘红核子’和‘四季蜜’龙眼的RNA提取与纯化36
• 2.1.1 总RNA的提取与纯化36
• 2.1.2 RNA的检测36
• 2.2 cDNA的合成36-37
• 2.3 引物设计与合成37
• 2.4 SVP基因片段的PCR扩增37
• 2.5 目的片段的回收37-38
• 2.6 载体与目的片段的连接38
• 2.7 产物的连接及转化38
• 2.8 测序及结果分析38-39
• 2.9 ‘红核子’龙眼SVP基因的表达分析39
• 2.9.1 ‘红核子’龙眼RNA的提取及纯化39
• 2.9.2 RNA的检测39
• 2.9.3 ‘红核子’龙眼SVP基因的表达分析39
• 3. 结果与分析39-52
• 3.1 ‘四季蜜’与‘红核子’龙眼RNA的提取39
• 3.2 SVP基因的克隆39-50
• 3.2.1 SVP645基因的cDNA克隆39-47
• 3.2.2 SVP2719 基因 cDNA 的克隆47-50
• 3.3 龙眼SVP基因在花芽分化过程的表述50-52
• 3.3.1 ‘红核子’龙眼RNA的提取及纯化50-51
• 3.3.2 龙眼SVP645基因的表达51-52
• 3.3.3 龙眼SVP2719基因的表达52
• 4. 讨论52-55
• 第四章 龙眼SVP2719基因植物表达载体构建及转化烟草55-73
• 1. 材料和仪器55-56
• 1.1 材料55
• 1.2 根癌农杆菌及载体55
• 1.3 试验仪器与试剂55
• 1.4 培养基与培养条件55-56
• 2. 试验方法56-59
• 2.1 龙眼SVP2719基因(带有5’端UTR序列)的克隆56
• 2.2 龙眼SVP2719基因表达载体的构建56-58
• 2.2.1 龙眼SVP2719基因与表达载体质粒提取56-57
• 2.2.2 龙眼SVP2719基因与表达载体质粒酶切57-58
• 2.3 龙眼SVP2719基因与表达载体的连接58
• 2.4 龙眼SVP2719基因重组质粒转化大肠杆菌58-59
• 2.5 龙眼SVP2719基因重组质粒的验证59
• 2.5.1 PCR鉴定59
• 2.5.2 双酶切鉴定59
• 3. 龙眼SVP2719基因重组质粒转化根癌农杆菌59-60
• 3.1 龙眼SVP2719基因重组质粒的提取59
• 3.2 根癌农杆菌EHA105的活化及感受态细胞制备59-60
• 3.2.1 根癌农杆菌的活化59
• 3.2.2 根癌农杆菌感受态细胞的制备59-60
• 3.3 龙眼SVP2719基因重组质粒转化EHA10560
• 3.4 龙眼SVP2719基因重组质粒转化EHA105验证60
• 3.4.1 PCR鉴定60
• 3.4.2 双酶切鉴定60
• 4. 根癌农杆菌介导的SVP2719基因转化本氏烟草60-61
• 4.1 烟草的播种及外植体预培养60-61
• 4.2 烟草外植体的转化61
• 4.3 烟草抗性芽的筛选61
• 4.4 抗性芽的生根培养61
• 4.5 抗性植株炼苗及移栽61
• 5. 烟草抗性植株的分子鉴定61-63
• 5.1 烟草抗性植株DNA及RNA的提取61-63
• 5.1.1 DNA的提取61-62
• 5.1.2 RNA的提取62-63
• 5.2 DNA鉴定63
• 5.3 半定量检测63
• 5.4 荧光定量PCR检测63
• 6. 结果与分析63-70
• 6.1 龙眼SVP2719基因植物表达载体的构建63-64
• 6.2 龙眼SVP2719基因重组载体转化根癌农杆菌64-65
• 6.3 根癌农杆菌介导的SVP2719基因转化本氏烟草65-66
• 6.4 烟草抗性植株的分子鉴定66-68
• 6.4.1 DNA鉴定66-67
• 6.4.2 半定量PCR检测67-68
• 6.4.3 荧光定量PCR检测68
• 6.5 转基因烟草性状观察68-70
• 7. 讨论70-73
• 第五章 总结与展望73-75
• 参考文献75-81
• 致谢81

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1 魏丹凤;龙眼SVP基因的克隆及功能研究[D];福建农林大学;2015年

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本文编号：355463