日本沼虾GC1qR基因的分子克隆和功能分析

发布时间：2022-07-11 18:28

　　日本沼虾（Macrobrachium nipponense）,俗称青虾,是我国重要的淡水经济虾类。然而,由于工业化的迅速发展,环境恶化问题成为虾养殖产业的限制性因素,并造成巨大经济损失。而氨氮是水体中常见的环境胁迫因子,过高的浓度会严重影响日本沼虾的免疫系统和生长发育。因此,探究日本沼虾抵抗氨氮胁迫的分子机理为提高虾类的免疫功能、保护日本沼虾的种质资源和培育抗逆品种奠定理论基础。gC1qR是一个分子量为33 kD单链的蛋白质,属于C1q受体家族,是一种表达广泛,多功能性的蛋白质;在脊椎和无脊椎动物的先天性免疫中发挥着重要的作用,可以保护机体抵抗病毒、细菌、不良环境的干扰。gC1qR可以在各种组织和细胞以及细胞表面表达。而在细胞表面表达的gC1qR蛋白质可以作为胞外、胞内、微生物以及病毒蛋白分子的受体,因此被称为多功能伴侣。本研究以日本沼虾为实验材料,随机分为对照组和处理组。对照组的日本沼虾饲养在正常水体不做任何处理,而处理组的日本沼虾饲养在氨氮浓度为98 mg/L的水体中。在处理0 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h和96 h后采集各组组织样品放于-80℃保存,... 

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 日本沼虾及其养殖现状
    1.2 氨氮的来源及其危害
        1.2.1 氨氮的来源
        1.2.2 氨氮对水生生物的危害
    1.3 甲壳动物的免疫系统
    1.4 gC1qR
        1.4.1 gC1qR的结构与功能
        1.4.2 gC1qR的研究进展
    1.5 研究的目的和意义
2 材料方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 样品采集
        2.1.2 主要仪器设备
        2.1.3 实验耗材
        2.1.4 实验试剂
        2.1.5 实验所用引物
        2.1.6 主要数据库及生物信息学软件
    2.2 试验方法
        2.2.1 纳氏试剂法测定实验用水氨氮含量
        2.2.2 日本沼虾氨氮胁迫和样品采集
        2.2.3 酶活力测定
        2.2.4 组织切片制备
        2.2.5 苏木精-伊红(HE)染色
        2.2.6 组织总RNA提取
        2.2.7 RNA质量检测和定量
        2.2.8 反转录
        2.2.9 RACE扩增目的基因全长c DNA
        2.2.10 PCR产物回收与载体的连接
        2.2.11 大肠杆菌的转化及测序
        2.2.12 生物信息学分析
        2.2.13 荧光定量PCR
        2.2.14 构建重组质粒
        2.2.15 原核表达及纯化
        2.2.16 诱导表达
        2.2.17 多克隆抗体制备
        2.2.18 Western-blot分析
        2.2.19 RNA干扰
3 结果与分析
    3.1 氨氮对日本沼虾的致死率测定
    3.2 氨氮胁迫后日本沼虾非特异性免疫指标分析
    3.3 氨氮胁迫后日本沼虾的组织学分析
    3.4 gC1qR基因全长cDNA克隆和序列分析
        3.4.1 日本沼虾gC1qR基因的分子克隆
        3.4.2 日本沼虾gC1qR基因序列分析
        3.4.3 日本沼虾gC1qR蛋白的二级、三级结构预测
    3.5 氨氮处理后日本沼虾gC1qR基因表达分析
        3.5.1 氨氮处理后日本沼虾gC1qR基因在mRNA水平表达分析
        3.5.2 氨氮处理后日本沼虾gC1qR基因在肝胰腺组织和鳃组织中的表达分析
        3.5.3 日本沼虾gC1qR基因的原核表达
        3.5.4 氨氮处理后日本沼虾gC1qR基因在蛋白水平表达
    3.6 RNA干扰和氨氮处理后日本沼虾gC1qR基因的表达分析
4 讨论
    4.1 氨氮胁迫造成日本沼虾免疫系统和器官损伤
    4.2 日本沼虾gC1qR基因多功能性和高表达
    4.3 RNA干扰后氨氮处理导致日本沼虾高死亡率
5 结论
参考文献
致谢
攻读硕士期间发表论文



本文编号：3658659