抗微小隐孢子虫卵囊壁单克隆抗体的制备

发布时间：2022-10-21 16:56

　　微小隐孢子虫是一种肠道寄生虫,是引起世界范围内腹泻的重要原因。隐孢子虫在环境中以卵囊形式存在,人和动物误食了被卵囊污染的水或食品后感染,至今尚无有效的治疗药物和疫苗。目前,国际上检测隐孢子虫的金标准是免疫学方法EPA 1623,此方法的关键之处在于需要一个敏感特异的卵囊壁单克隆抗体,而国内并没有研制出相关试剂,因此本研究在于制备针对微小隐孢子虫卵囊壁蛋白单克隆抗体,以弥补国内空白。本研究采用两种免疫策略来制备单克隆抗体。第一种是选取文献报道的和生物学分析可能位于卵囊壁的4个蛋白（Gp15,COWP6,POWP6和MPA2）,通过选取高度特异的氨基酸序列设计多肽,将它们分别偶联至载体蛋白KLH和BSA上,分别用于免疫小鼠和ELISA的血清效价检测。另一种是采用传统的卵囊进行免疫。将1?10~6个微小隐孢子虫卵囊经80℃水浴灭活30min后,与弗氏佐剂乳化后免疫BALB/c小鼠,共免疫四次,每次间隔14天。通过间接免疫荧光来筛选定位于卵囊壁的单抗。经过生物信息学分析,共设计了5个多肽,分别为c-GGKRIEVAVP（Gp15）、c-FYTGANSGTTNG（Gp15）、CESKIHEKHH... 

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

卵囊壁结构示意图

间接ELISA法对血清抗体效价的检测Fig1.1DetectionofserumantibodytiterbyindirectELISA结果显示，10只小鼠均免疫成功，取免疫效果最好的小鼠继续后续试验，

种多肽的血清抗体的SDS-PAGE分析


本文编号：3696027