滇补、旱冬瓜叶片提取物对云南切梢小蠹卵黄原蛋白及其受体基因转录的影响

发布时间：2017-05-19 07:18

  本文关键词：滇补、旱冬瓜叶片提取物对云南切梢小蠹卵黄原蛋白及其受体基因转录的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：云南切梢小蠹Tomicus yunnanensis是为害多种松树的次期性蛀干害虫,其寄主中又以云南松受害最为严重。经过前期的研究发现滇朴、旱冬瓜叶片提取物能够干扰云南切梢小蠹产卵。因此,本研究选择了与昆虫产卵密切相关的卵黄原蛋白及其受体基因进行研究,并且探索滇朴、旱冬瓜叶片提取物对云南切梢小蠹卵黄原蛋白及其受体基因在转录水平上的影响,这有利于进一步阐明非寄主气味影响云南切梢小蠹产卵的分子机制。为了能更方便快速获得云南切梢小蠹的卵黄原蛋白及其受体基因序列,对云南切梢小蠹进行了转录组测序。测序共获得了28837383条clean reads,经拼接得到了47408条unigenes。这些unigenes有17023条在Nr数据库里得到注释(E-value10-5)。基于构建的转录组数据库,共鉴定获得卵黄原蛋白及其受体基因序列各4条。依据转录组鉴定获得的片段序列以及卵黄原蛋白及其受体基因的保守结构序列设计引物,克隆获得了云南切梢小蠹卵黄原蛋白及其受体基因片段,长度分别为570 bp和162 bp。多序列比对分析发现,云南切梢小蠹卵黄原蛋白基因与黑山大小蠹Dendroctonus ponderosae、白松脂象甲Pissodes strobi及棉铃象甲虫Anthonomus grandis卵黄原蛋白基因在氨基酸水平上相似性分别高达76%、61%、60%。云南切梢小蠹卵黄原蛋白受体基因与黑山大小蠹、赤拟谷盗Tribolium castaneum卵黄原蛋白受体基因在氨基酸水平上相似性分别为88%和47%。卵黄原蛋白和卵黄原蛋白受体系统发育树结果均显示云南切梢小蠹与鞘翅目昆虫聚在一起。实时荧光定量PCR结果显示,云南切梢小蠹卵黄原蛋白基因在雌虫的头、胸、翅、卵巢和其余残体中均有表达,而卵黄原蛋白受体基因则在雌虫卵巢组织特异性表达。卵黄原蛋白和卵黄原蛋白受体在不同发育时期的表达具有一致性,均在蛹期及成熟的雌虫中转录水平较高,在其他时期的转录水平相对较低或极其微弱。滇朴、旱冬瓜叶片提取物干扰实验发现,滇朴叶片提取物干扰云南切梢小蠹后其卵黄原蛋白基因的转录水平与对照组相比均下降;而卵黄原蛋白受体基因的转录水平与对照相比没有明显的变化规律。旱冬瓜叶提取物干扰20 d和40 d后,云南切梢小蠹卵黄原蛋白和卵黄原蛋白受体基因的转录水平与对照相比均有所下降,但是,干扰60 d后卵黄原蛋白和卵黄原蛋白受体基因的转录水平却都高于对照组,尤其是卵黄原蛋白基因。综上所述,本文为进一步阐明非寄主气味影响云南切梢小蠹产卵的分子机制提供了基础资料,有利于找到云南切梢小蠹更加有效的防治方法。
【关键词】：云南切梢小蠹 非寄主气味 卵黄原蛋白及其受体 转录组 实时荧光定量PCR
【学位授予单位】：西南林业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S763.38
【目录】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-10
• 1 前言10-22
• 1.1 云南切梢小蠹研究概况10
• 1.2 昆虫卵黄原蛋白及其受体的研究进展10-17
• 1.2.1 卵黄原蛋白及其基因10-14
• 1.2.2 卵黄原蛋白受体及其基因14-17
• 1.3 非寄主气味对昆虫的影响17-20
• 1.3.1 植物挥发性物质对昆虫行为的影响17-20
• 1.4 研究的目的和意义20-22
• 2 材料与方法22-30
• 2.1 试验材料22-23
• 2.1.1 昆虫样品采集22
• 2.1.2 主要的仪器设备22-23
• 2.2 云南切梢小蠹转录组分析23-26
• 2.2.1 总RNA的提取和质量检测23
• 2.2.2 cDNA文库的构建和转录组测序流程23-24
• 2.2.3 转录本拼接24-25
• 2.2.4 基因功能的注释25-26
• 2.3 云南切梢小蠹卵黄原蛋白及其受体基因片段的克隆和表达模式分析26-28
• 2.3.1 总RNA提取26
• 2.3.2 3'-RACE cDNA合成26
• 2.3.3 卵黄原蛋白基因片段的克隆26-27
• 2.3.4 卵黄原蛋白受体基因片段的克隆27
• 2.3.5 序列分析27
• 2.3.6 荧光定量PCR27-28
• 2.4 滇朴、旱冬瓜叶片提取物对云南切梢小蠹卵黄原蛋白及其受体基因转录的影响28-30
• 2.4.1 滇朴、旱冬瓜植物叶片的采集及处理28-29
• 2.4.2 滇朴、旱冬瓜叶片提取物对云南切梢小蠹干扰实验29
• 2.4.3 荧光定量PCR29-30
• 3 结果与分析30-52
• 3.1 云南切梢小蠹转录组分析30-39
• 3.1.1 总RNA的检测30
• 3.1.2 原始数据以及序列拼接30-32
• 3.1.3 转录组数据分析32-39
• 3.1.3.1 基因功能注释32-35
• 3.1.3.2 GO分类35-37
• 3.1.3.3 KOG分类37-38
• 3.1.3.4 KEGG分类38-39
• 3.2 云南切梢小蠹卵黄原蛋白及其受体基因片段的克隆及表达模式分析39-49
• 3.2.1 卵黄原蛋白基因片段的克隆及序列分析39-43
• 3.2.2 卵黄原蛋白受体基因片段的克隆及序列分析43-46
• 3.2.3 卵黄原蛋白及其受体基因在不同组织及各发育阶段的表达46-49
• 3.3 滇朴、旱冬瓜叶片提取物对云南切梢小蠹卵黄原蛋白及其受体基因转录的影响49-52
• 4 结论及讨论52-56
• 4.1 云南切梢小蠹转录组数据的分析52
• 4.2 云南切梢小蠹卵黄原蛋白基因片段的克隆及序列分析52-54
• 4.3 滇朴、旱冬瓜叶片提取物对云南切梢小蠹卵黄原蛋白及受体基因转录的影响54-56
• 参考文献56-66
• 个人简介66-67
• 导师简介67-68
• 致谢68

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本文编号：378060