萎缩芽孢杆菌SF1拮抗蛋白质的研究

发布时间：2017-05-20 04:06

  本文关键词：萎缩芽孢杆菌SF1拮抗蛋白质的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：胡麻枯萎病是由尖孢镰刀菌胡麻专化型引起的一种严重的真菌性病害。本实验室筛选获得一株萎缩芽孢杆菌SF1,能抑制尖孢镰刀菌胡麻专化型菌株的生长。前期试验采用非接触平板培养法测定胞外挥发性物质具有抑菌作用；采用蛋白酶处理发酵证明胞外蛋白具有较好的抑菌活性。本论文将在此基础上对菌株SF1的有效拮抗蛋白质进行进一步研究。首先,采用体外平板实验,观察确定菌株SF1分泌的胞外物质可以抑制病原菌菌落的生长,抑菌率为48.18%,并且能有效抑制病原菌菌丝的生长和孢子萌发,导致病原菌菌丝及孢子形态畸形。其次,运用蛋白质双向电泳技术对生防菌SF 1和标准菌株萎缩芽孢杆菌CGMCC1.3383的胞外蛋白质进行了蛋白质组学水平的差异比较分析,共找到154个差异点,对其中33个差异极显著的上调蛋白进行质谱鉴定,成功鉴定出14种蛋白质：Thioredoxin-like protein ykuU(类硫氧还蛋白ykuU)、2,3-bisphosphoglycerate-independent phosphoglycerate mutase (2,3-二磷酸甘油酸非依赖型磷酸甘油酸变位酶)、Dihydrolipoyl dehydrogenase (二氢硫辛酸脱氢酶)、Inosine-5'-monophosphate dehydrogenase(次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶)、(3R)-hydroxymyristoyl-[acyl-carrier-protein] dehydratase (β-羟脂酰ACP脱水酶)、Bifunctional protein GlmU (双功能蛋白GlmU)、Putative aminopeptidase ytoP (推定的氨基肽酶ytoP)、Probable4-aminobutyrate aminotransferase(可能的4-氨基丁酸转氨酶)、Putative aminopeptidase yhfE(推定的氨基肽酶yhfE)、Pyrrolidone -carboxylate peptidase(吡咯烷磷酸肽酶)、Beta-glucanase(β-葡聚糖酶)、Minor extracellular protease vpr(小胞外蛋白酶vpr)、Glycerophosphoryl diester phosphodiesterase(甘油磷酸二酯磷酸二酯酶),这14个蛋白质点具有潜在的抗菌生防活性,有待于进一步研究分析。
【关键词】：萎缩芽孢杆菌 胡麻枯萎病 拮抗蛋白质 双向电泳
【学位授予单位】：内蒙古大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S476.1;S435.659
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 1 引言10-17
• 1.1 胡麻与胡麻枯萎病10-11
• 1.1.1 胡麻10
• 1.1.2 胡麻枯萎病10-11
• 1.1.3 胡麻枯萎病的发病条件及防治措施11
• 1.2 芽孢杆菌在生物防治中的研究11-13
• 1.2.1 生物防治概述11-12
• 1.2.2 芽孢杆菌作为生防菌的研究进展12-13
• 1.3 蛋白质组学研究技术13-16
• 1.3.1 蛋白质组学概述13-14
• 1.3.2 双向聚丙稀酰胺凝胶电泳14-15
• 1.3.3 质谱技术15-16
• 1.4 本研究意义和内容16-17
• 1.4.1 本研究意义16
• 1.4.2 本研究的主要内容16-17
• 2. 材料与方法17-29
• 2.1 实验材料17-20
• 2.1.1 菌种17
• 2.1.2 常用培养基和溶液17-18
• 2.1.3 主要试剂、试剂盒18-19
• 2.1.4 主要仪器设备19-20
• 2.2 实验方法20-29
• 2.2.1 生防菌SF1的培养方法20
• 2.2.2 尖孢镰刀菌胡麻专化型菌株4a的培养方法20-21
• 2.2.3 生防菌SF1胞外物质体外抑菌作用21-22
• 2.2.4 胞外蛋白样品的制备22-24
• 2.2.5 双向电泳体系的建立24-27
• 2.2.6 差异蛋白的质谱检测27-29
• 3. 结果与讨论29-44
• 3.1 生防菌SF1胞外物质外抑菌作用29-31
• 3.1.1 生防菌SF1胞外物质对病原菌菌落生长的抑制29
• 3.1.2 生防菌SF1胞外物质对病原菌菌丝和孢子形态的影响29-30
• 3.1.3 生防菌SF1胞外物质对病原菌菌丝生长的抑制30-31
• 3.1.4 生防菌SF1胞外物质对病原菌孢子萌发状况的抑制31
• 3.2 蛋白质含量的测定31-32
• 3.3 双向电泳分析蛋白差异32-44
• 3.3.1 双向电泳图谱32-33
• 3.3.2 差异蛋白表达分析33-38
• 3.3.3 差异蛋白质谱鉴定及数据库检索结果38-40
• 3.3.4 差异蛋白质功能分析40-44
• 4. 结论与展望44-45
• 4.1 结论44
• 4.2 工作展望44-45
• 参考文献45-50
• 硕士期间科研成果50-51
• 致谢51

【参考文献】

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本文编号：380608