半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis）R-spondin1和R-spondin3基因的克隆与表达分析

发布时间：2024-01-14 10:57

　　半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)是我国极其重要的海洋养殖经济鱼类,雌雄个体差异较大。R-spondin(Rspo)蛋白家族共有4位成员,Rspo1-4,为分泌性蛋白。Rspo蛋白家族成员含有相似度很高的保守结构域：2个富含半胱氨酸的furin-like结构功能域(furin-like cysteine rich domain,FU)和1个血小板反应蛋白结构域(thrombospondin-type 1 domain,TSP1)。已知所有的成员蛋白均能与Wnt信号通路相互作用,在脊椎动物发育过程中发挥着不同的功能。Rspo1基因作为一个卵巢决定和分化的最佳候选基因,在性别决定、皮肤分化和恶性肿瘤等方面都具有重要的功能。Rspo3基因能调控造血干细胞命运、促进血管生成、调控哺乳动物胎盘发育等等。本实验主要是通过同源克隆技术和RACE PCR技术(Rapid amplification of cDNA ends PCR)分离出半滑舌鳎Rspo1基因和Rspo3基因的cDNA全长,利用原位杂交和荧光定量PCR对其基因表达进行了研究,结合所得到的结果通过生物信息学分析,对...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 文献综述
    0 引言
    1 Rspo家族简介
        1.1 Rspo1基因
        1.2 Rspo3基因
        1.3 Rspo家族其它基因
        1.4 Rspo家族与疾病
    2 WNT信号通路
        2.1 经典WNT信号通路
        2.2 非经典WNT信号通路
        2.3 Rspo与WNT信号通路
    3 鱼类的性别决定
        3.1 遗传决定型
        3.2 环境决定型
        3.3 温度决定型
        3.4 行为决定型
    4 本研究的意义
第二章 半滑舌鳎Rspo1基因的克隆和表达分析
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 本实验所用引物(表2-1)
        1.3 总RNA的提取、纯化、检测
        1.4 cDNA的合成
        1.5 半滑舌鳎Rspo1基因的克隆
        1.6 半滑舌鳎Rspo1基因的序列及蛋白结果预测分析
        1.7 半滑舌鳎Rspo1基因qRT-PCR分析
        1.8 原位杂交
        1.9 半滑舌鳎Rspo1-GFP载体构建
        1.10 半滑舌鳎Rspo1基因对Wnt通路的影响
    2 结果
        2.1 RNA的检测
        2.2 半滑舌鳎Rspo1基因全长及序列分析
        2.3 半滑舌鳎Rspo1基因的表达分析
        2.4 半滑舌鳎Rspo1基因的组织切片原位杂交
        2.5 半滑舌鳎Rspo1-GFP融合质粒在斑马鱼体内的表达
        2.6 半滑舌鳎Rspo1基因对Wnt通路的影响
    3 讨论
第三章 半滑舌鳎Rspo3基因的克隆和表达分析
    1 材料与方法
    2 结果
        2.1 半滑舌鳎Rspo3基因全长及序列分析
        2.2 半滑舌鳎Rspo3基因成鱼组织的表达分析
        2.3 半滑舌鳎Rspo3-GFP融合质粒在斑马鱼体内的表达
        2.4 半滑舌鳎Rspo3基因的细胞转染
    3 讨论
结论
参考文献
致谢
个人简历



本文编号：3878099