鸡RNF11基因的克隆及对先天免疫中相关基因表达的影响

发布时间：2024-01-25 14:29

　　先天免疫是生物体在发育的长期过程中建立起来的一系列天然保护能力,它提供了一种可以迅速阻碍病毒感染和传播的屏障。环指蛋白11(RNF11)为RING-finger (Really Interesting New Gene)家族成员之一,属于E3泛素连接酶家族成员,在人的抗病毒通路中发挥着重要的作用,RNF11是否也在鸡的免疫抗病毒过程发挥相同的作用,参与炎症反应的调节,目前还没有相关报道。本试验首先通过克隆鸡RNF11基因CDS区,并进行序列分析和蛋白相关特性的预测；其次对1日龄SPF鸡腹腔注射禽白血病病毒(ALV-J),利用定量PCR技术检测RNF11以及干扰素IFN-a和IFN-β基因在14、21、28和35日龄鸡法氏囊、脾脏和胸腺中的表达；最后,通过构建RNF11基因的过表达载体和干扰载体并转染到鸡成纤维细胞,分析转染后的24和28小时(hps),RNF11对IFN-β基因表达的影响,进一步验证RNF11在鸡抗病毒通路上的作用,进一步检测炎性因子IL2和IL10基因的表达,初步探讨RNF11对炎症反应的影响。试验结果如下：1)通过分析克隆所得鸡RNF11基因的CDS区序列,得到了一...

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摘要
ABSTRACT
常用词语缩写
1. 文献综述
    1.1 先天免疫抗病毒信号通路
    1.2 RNF11基因
        1.2.1 人的RNF11基因
        1.2.2 RNF11在组织上的表达
    1.3 RNF11的功能
        1.3.1 RNF11与Ets1绑定激活转录
        1.3.2 RNF11在泛素化调节中起重要作用
        1.3.3 RNF11调节TGF1信号通路
        1.3.4 RNF11负反馈调节EGFR信号通路
        1.3.5 RNF11提高DNA损伤以及增强信号反应
    1.4 RNF11在抗病毒通路上的负调节作用
    1.5 本试验的目的意义及主要研究内容
2. 材料与方法
    2.1 克隆试验
        2.1.1 克隆试验材料
        2.1.2 主要试剂与仪器
        2.1.3 主要配制试剂
        2.1.4 试验方法
        2.1.5 序列分析
    2.2 机体攻毒试验材料与方法
        2.2.1 机体攻毒试验材料
        2.2.2 主要试剂与仪器
        2.2.3 试验方法
        2.2.4 统计分析
    2.3 细胞水平试验
        2.3.1 细胞试验材料
        2.3.2 主要试剂与仪器
        2.3.3 试验方法
3. 结果与分析
    3.1 克隆试验
        3.1.1 目的片段的测序
        3.1.2 鸡RNF11基因CDS的碱基分析
        3.1.3 鸡RNF11基因CDS区序列的比对结果
        3.1.4 鸡RNF11基因CDS密码子及氨基酸组成分析
        3.1.5 蛋白质磷酸化位点的预测
        3.1.6 RNF11蛋白疏水性分析
        3.1.7 鸡RNF11蛋白质信号肽分析
        3.1.8 鸡RNF11蛋白质跨膜螺旋特征分析
        3.1.9 蛋白质二级结构的预测
        3.1.10 鸡RNF11蛋白质保守结构域预测
        3.1.11 鸡RNF11蛋白质亚细胞定位预测
    3.2 J亚群禽白血病病毒攻毒
        3.2.1 ALV-J攻毒后病毒在鸡免疫组织中的复制情况
        3.2.2 ALV-J感染机体后法氏囊中RNF11基因和干扰素基因的表达
        3.2.3 ALV-J感染机体后脾脏RNF11基因和干扰素基因的表达
        3.2.4 ALV-J感染机体后胸腺RNF11基因和干扰素基因的表达
        3.2.5 ALV-J感染机体后RNF11基因和干扰素基因的表达曲线
    3.3 细胞试验
        3.3.1 RNF11基因的过表达
        3.3.2 RNF11基因的干扰
4. 讨论
    4.1 鸡RNF11基因的克隆
    4.2 ALV-J对不同时期免疫组织中RNF11和IFN-α/β基因表达量的影响
    4.3 RNF11抑制抗病毒通路
    4.4 RNF11基因对炎症反应的影响
5 结论
参考文献
致谢
攻读硕士期间发表论文情况



本文编号：3884987