南瓜种质资源遗传多样性SRAP和ISSR分析

发布时间：2017-08-23 11:39

  本文关键词：南瓜种质资源遗传多样性SRAP和ISSR分析

  更多相关文章： 南瓜 SRAP ISSR 分子标记 遗传多样性

【摘要】：南瓜具有丰富的营养价值、保健功能和加工价值,培育优质的南瓜品种越来越受到育种家的重视。利用分子标记技术对南瓜种质资源进行遗传多样性和亲缘关系分析,对于辅助南瓜育种十分重要。本论文利用SRAP和ISSR两种分子标记技术,分析85份南瓜种质资源遗传多样性,构建遗传聚类图,鉴定种质资源间的亲缘远近,同时对南瓜的田间性状进行调查,为种质资源鉴定、分类、杂交育种工作提供理论依据。主要结果如下：1南瓜SRAP反应体系的建立以‘密本’南瓜为筛选体系材料,通过单因素试验对南瓜SRAP扩增体系中的Mg2+、dNTP、Taq酶、引物、DNA和扩增程序中的退火温度与循环次数进行优化。结果确立南瓜最佳20μL SRAP体系为：0.20mmol/L dNTP,1.50U Taq酶,80ng DNA,0.16μmol/L的单条引物,1.50mmol/LMg2+,2μL lOxBuffer;最优反应程序为：94℃预变性5min；接着94℃1min,35℃ 1min,72℃ 1min,5个循环；然后94℃ 1min,52℃1min,72℃ 1min,35个循环；最后72℃延伸10min。2南瓜种质资源遗传多样性SRAP分析从100对SRAP引物中挑出17对引物进行PCR扩增,获得总条带200条,差异带187条,13条条带为所有南瓜共有,多态性比例为93.50%。通过Ntsys2.10e软件计算出85份南瓜种质资源遗传相似系数为0.4500-0.9850。通过聚类,将收集的南瓜种质资源分为美洲南瓜、中国南瓜、印度南瓜三类,亲缘关系较近的是中国南瓜与美洲南瓜,两类南瓜与印度南瓜的亲缘关系均比较远。3南瓜ISSR反应体系的建立以‘密本’南瓜为筛选体系材料,采用单因素试验,对ISSR反应体系的Mg2+、 dNTP、Taq酶、引物和DNA等5个因素进行优化。结果表明：南瓜25μiL ISSR最佳反应体系包括：2.50μL lOxBuffer,2.00mmol/L Mg2+,0.30mmol/L dNTP, 1.00UTaq酶,0.48μmol/L引物,75ng DNA。在此基础上,对筛选出的12条ISSR引物的退火温度进行优化,确定每条引物的最佳退火温度。4南瓜种质资源遗传多样性ISSR分析从100条ISSR引物中筛选出12条引物进行PCR扩增,获得总条带125条,差异带115条,10条条带为所有南瓜共有,多态性比例为92.00%。通过Ntsys2.10e软件计算出85份南瓜种质资源的遗传相似系数为0.3840-1.0000。通过聚类,将收集的南瓜种质资源分为美洲南瓜、中国南瓜、印度南瓜三类,亲缘关系较近的是中国南瓜与美洲南瓜,两类南瓜与印度南瓜的亲缘关系均比较远。5南瓜田间性状调查结果田间性状调查结果为：子叶长3.40cm-7.30cm;子叶宽2.15cm-4.38cm;子叶长宽比1.30-2.30；瓜重在0.41kg-8.60kg;瓜外横径8.60cm-26.40cm；瓜内横径4.70cm-19.80cm;果实厚度1.85cm.3.48cm;瓜纵径5.20cm-51.20cm:生长势有强和中等两种；主蔓横切面形状有圆形和五棱形两种；叶面白斑有多、中等、少量之分；叶形上有心脏形、心脏五角、近三角、近圆形、掌状五角、掌状六种；生长习性有矮生和蔓生两种；嫩瓜皮色上有浅绿、深绿、浅黄、绿色、橙红、黄色六种；老瓜皮色上有橙黄、黄、棕黄、橙红、深绿、墨绿、黄褐七种；老瓜肉色有橙黄、金黄、浅黄、黄、白五种；瓜面特征上有光滑、多沟、瘤突、皱缩、多棱五个特征；瓜形上有长颈圆筒、椭圆、梨形、扁圆、近圆、长筒六种；瓜面蜡粉上有多、少、无之分。
【关键词】：南瓜 SRAP ISSR 分子标记 遗传多样性
【学位授予单位】：福建农林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S642.1
【目录】：

• 缩略词表8-9
• 摘要9-11
• Abstract11-14
• 第一章 前言14-22
• 1 遗传多样性研究14-18
• 1.1 遗传多样性的概念14
• 1.2 遗传多样性的研究方法14-17
• 1.2.1 形态学标记14-15
• 1.2.2 细胞学标记15
• 1.2.3 生化标记15
• 1.2.4 DNA分子标记15-17
• 1.3 遗传多样性研究的意义17-18
• 2 南瓜遗传多样性的研究现状18-21
• 2.1 南瓜形态标记18
• 2.2 南瓜细胞学标记18
• 2.3 南瓜同工酶标记18-19
• 2.4 南瓜分子标记19-21
• 3 研究的目的与意义21
• 4 研究内容21-22
• 第二章 南瓜种质资源遗传多样性SRAP分析22-40
• 第一节 南瓜SRAP反应体系的建立22-32
• 1 材料与方法22-25
• 1.1 材料22-24
• 1.1.1 实验材料22-23
• 1.1.2 实验仪器23
• 1.1.3 实验试剂23-24
• 1.2 方法24-25
• 1.2.1 南瓜DNA提取方法24
• 1.2.2 SRAP初始扩增条件及扩增程序24
• 1.2.3 南瓜SRAP-PCR扩增反应体系及程序优化24-25
• 2 结果与分析25-30
• 2.1 基因组DNA的检测结果25-26
• 2.2 Mg~(2+)对SRAP-PCR扩增的影响26
• 2.3 dNTP对SRAP-PCR扩增的影响26-27
• 2.4 Taq酶对SRAP-PCR扩增的影响27
• 2.5 引物浓度对SRAP-PCR扩增的影响27-28
• 2.6 模板DNA对SRAP-PCR扩增的影响28
• 2.7 退火温度对SRAP-PCR扩增的影响28-29
• 2.8 循环次数对SRAP-PCR扩增的影响29
• 2.9 南瓜SRAP-PCR扩增体系及扩增程序的确立29-30
• 3 讨论30-32
• 第二节 南瓜种质资源遗传多样性SRAP分析32-40
• 1 材料与方法32
• 1.1 材料32
• 1.1.1 实验材料32
• 1.1.2 实验仪器32
• 1.1.3 实验试剂32
• 1.2 方法32
• 1.2.1 PCR反应及电泳32
• 1.2.2 SRAP引物的筛选32
• 1.2.3 数据处理与分析32
• 2 结果与分析32-38
• 2.1 引物筛选32-33
• 2.2 17引物对85个南瓜品种的SRAP扩增结果33-35
• 2.3 SRAP聚类结果分析35-38
• 3 讨论38-40
• 第三章 南瓜种质资源遗传多样性ISSR分析40-54
• 第一节 南瓜ISSR反应体系的建立40-47
• 1 材料与方法40-41
• 1.1 材料40
• 1.1.1 实验材料40
• 1.1.2 实验仪器40
• 1.1.3 试剂40
• 1.2 方法40-41
• 1.2.1 ISSR原初扩增条件及PCR扩增程序40
• 1.2.2 南瓜ISSR扩增反应体系的优化40
• 1.2.3 退火温度的优化40-41
• 2 结果与分析41-45
• 2.1 Mg~(2+)浓度对ISSR扩增的影响41
• 2.2 dNTP浓度对ISSR扩增的影响41-42
• 2.3 Taq酶浓度对ISSR扩增的影响42
• 2.4 引物浓度对ISSR扩增的影响42
• 2.5 DNA用量对ISSR扩增的影响42-43
• 2.6 退火温度对ISSR扩增的影响43-44
• 2.7 南瓜ISSR-PCR扩增体系及扩增程序的确立44-45
• 3 讨论45-47
• 第二节 南瓜种质资源遗传多样性ISSR分析47-54
• 1 材料与方法47
• 1.1 材料47
• 1.1.1 实验材料47
• 1.1.2 实验仪器47
• 1.1.3 实验试剂47
• 1.2 方法47
• 1.2.1 PCR反应及电泳47
• 1.2.2 ISSR引物的筛选47
• 1.2.3 数据处理与分析47
• 2 结果与分析47-53
• 2.1 引物的筛选47-48
• 2.2 引物对85个南瓜品种的ISSR扩增结果48-50
• 2.3 ISSR聚类结果分析50-53
• 3 讨论53-54
• 第四章 南瓜田间性状调查54-63
• 1 材料与方法54
• 1.1 材料54
• 1.1.1 实验材料54
• 1.1.2 主要仪器设备54
• 1.2 方法54
• 2 结果与分析54-55
• 3 讨论55-63
• 第五章 小结63-65
• 参考文献65-70
• 研究生期间发表相关论文情况70-71
• 附录171-74
• 附录274-77
• 附录377-86
• 附录486-98
• 致谢98

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本文编号：724852