高效液相色谱法测定婴幼儿营养强化奶粉中核苷酸含量

发布时间：2021-07-20 16:49

　　建立了测定婴幼儿营养强化奶粉中5种核苷酸含量的高效液相色谱法。样品经碱性磷酸酯酶水解,将核苷酸转化成相应的核苷,采用硼酸凝胶吸附净化,使用Boston pHlex ODS色谱柱（250 mm×4.6 mm,5.0μm）分离,流动相A为含2 mmol/L 1-己烷磺酸钠的20.9 mmol/L NH₄Ac（pH为4.3）;流动相B为6.0%乙腈-离子对试剂（含2 mmol/L 1-己烷磺酸钠的20.9 mmol/L NH₄Ac,pH为4.3）,梯度洗脱后,二极管阵列检测器检测,检测波长为260 nm,内标法定量。结果表明,5种核苷在线性范围内相关性好,相关系数R²大于0.999;5种核苷酸的回收率在80.00%～111.23%范围,相对标准偏差在1.8%～6.3%之间。检出限为0.4～1.0 mg/kg,定量限为1.0～3.0 mg/kg。该方法净化效果显著,分离效果好,是婴幼儿营养强化奶粉中5种核苷酸的有效检测方法。 

【文章来源】：分析科学学报. 2020,36(06)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

7种核苷混合标准溶液高效液相色谱图

样品溶液中7种核苷高效液相色谱图

核苷酸带有磷酸基团,酸性强,极性大,降低被测样品分子的极性,在常规色谱柱上保留能力比较差,目标物和杂质不能有效分离。虽然文献也有报道采用HILIC模式[18]进行分离,但是由于其强极性样品很难进行有效的净化。而核苷相对于核苷酸其分子的极性较弱,在碱性磷酸酶催化下脱去核苷酸上的磷酸基团,水解核苷酸生成核苷,降低了检测的目标物的极性,有效增加了使各化合物在色谱柱上的保留时间,如图3所示,腺嘌呤核苷酸在碱性磷酸酯酶作用下水解为腺嘌呤核苷,从而降低了极性。采用水解法将核苷酸水解成为核苷后,虽然降低了极性,但是乳粉基质复杂且添加了各种营养强化剂,仅采用蛋白质沉淀法达不到很好的效果,采用凝胶对复杂基质样品中核苷进行吸附清洗后,再将目标核苷释放出来,达到了富集和净化目的,从而排除基质的干扰能够准确的测定核苷的含量,从而间接准确测得核苷酸的含量。在检测过程中采用了内标法进行定量,进一步提高了定量的准确性。

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3293208