多重实时聚合酶链式反应熔解曲线法同步鉴别蓝鳍金枪鱼、裸盖鱼、异鳞蛇鲭

发布时间：2022-02-12 13:51

　　为实现鱼类及其制品掺假的快速鉴别,以蓝鳍金枪鱼（Thunnus thynnus）线粒体DNA的D-loop区、裸盖鱼（Anoplopoma fimbria）线粒体DNA的16S rRNA基因及异鳞蛇鲭（Lepidocybium flavobrunneum）线粒体DNA的ND4L基因为靶位点,设计扩增产物熔解温度（Tm）具有显著性差异的特异性引物,建立一种快速鉴别鱼类及其制品中蓝鳍金枪鱼、裸盖鱼、异鳞蛇鲭源性成分的3重实时聚合酶链式反应熔解曲线分析法,通过引物特异性、灵敏度及市售样品的检测,对该方法进行检验和评价。结果表明:构建优化的方法具有良好的特异性及灵敏度,单物种DNA检出限为0.001 ng,多物种混合DNA检出限均为0.1 ng,蓝鳍金枪鱼、裸盖鱼、异鳞蛇鲭源性成分的相对检出限分别为0.5%、1%、0.5%,通过对市售样品的检测表明,该方法可用于实际样品掺假的快速鉴别。 

【文章来源】：食品科学. 2020,41(24)北大核心EICSCD

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

real-time PCR体系的特异性

配制蓝鳍金枪鱼、裸盖鱼、异鳞蛇鲭的混合肉样（各物种源性成分含量比例相同，物种组合见表4），提取各样品D N A，以提取的D N A为模板进行多重real-time PCR扩增，并分析熔解曲线，再次验证所建多重real-time PCR体系的特异性，同时确定各物种成分熔解温度（Tm）分布范围。分析各样品熔解曲线图，结果如图2、3所示，所检样品的熔解曲线峰位置、峰个数均与样品的物种源性成分组成相对应，均没有非特异性峰出现的现象，进一步表明建立的多重real-time PCR体系具有很好的特异性。3次重复实验并计算各物种源性成分的Tm值，计算结果见表4。实验并统计不同引物浓度体系、不同模板浓度中3种鱼类的Tm值分布情况，由统计结果可知3种鱼类源性成分的熔解温度分布段分别为蓝鳍金枪鱼源性成分Tm值（74.98±0.60）℃、裸盖鱼源性成分Tm值（78.65±0.71）℃、异鳞蛇鲭源性成分Tm值（82.38±0.25）℃，各物种源性成分的Tm值均有偏移，异鳞蛇鲭源性成分的Tm值漂移范围最小，为0.5℃，裸盖鱼源性成分的Tm值漂移范围最大，为1.42℃，整体看来各物种源性成分的Tm值偏移跨度较小，表明所建方法稳定性较好；各物种源性成分Tm值范围之间相互不交叉，因此，分析所检测样品熔解曲线，根据谱图中溶解峰数和温度范围（即峰的位置）能准确判定所检样品中含有的物种。图2 多重real-time PCR检测各混合样DNA的熔解曲线

所建real-time PCR体系检测3种鱼类混合DNA的熔解曲线

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本文编号：3621837