诱导Paracin1.7生成的刺激因子的分离与纯化

发布时间：2024-02-04 05:26

　　旨在分离纯化枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中能够诱导细菌素Paracin1.7分泌的刺激因子,并探明其对副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei) HD1.7细菌素生成量及群体感应相关基因luxS表达的影响。本研究通过60%硫酸铵沉淀、CM Sepharose Fast Flow弱阳离子交换柱层析中度纯化及Superdex 75凝胶层析精度纯化,将获得的层析分离物与L. paracasei HD1.7共培养,检测共培养发酵液的抑菌活性及luxS基因的转录水平,并用SDS-PAGE与Native-PAGE检测分离物质。结果表明L. paracasei HD1.7抑菌活性为126.68%;luxS基因上调表达,为对照菌株的2.43倍;刺激因子的表观分子量约为30 kDa。本研究利用三步法初步分离纯化出诱导Paracin1.7生成的刺激因子,明确该刺激因子可以启动种间群体感应相关基因luxS,为L. paracasei HD1.7的群体感应研究奠定了理论和技术基础。

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【文章目录】：
0 引言
1 材料与方法
    1.1 菌株与培养基
        1.1.1 试验菌株
        1.1.2 培养基
    1.2 方法
        1.2.1 B.subtilis刺激因子发酵液的制备
        1.2.2 B.subtilis刺激因子的分离纯化
        1.2.3荧光定量PCR检测QS相关基因luxS的转录水平变化
        1.2.4 SDS-PAGE与Native-聚丙烯酰胺凝胶电泳
        1.2.5 试验数据的统计学分析
2 结果与分析
    2.1 60%硫酸铵沉淀
    2.2 CM Sepharose Fast Flow离子交换层析
    2.3 Superdex 75凝胶层析
    2.4 刺激因子的纯化得率
    2.5 SDS-PAGE检测分离物质表观分子量与Native-PAGE检测分离物质及活性验证
    2.6 QS相关基因lux S表达效果的检测
3 讨论与结论



本文编号：3895286