实时荧光定量PCR方法实现羊肉中鸡成分的精确定量

发布时间：2024-05-20 05:49

　　近年来,世界各地肉制品掺假情况频繁发生。为维护市场稳定,保障食品安全,迫切需要量化肉制品中所含动物成分的质量百分比。本研究建立了一种实时荧光定量PCR定量检测系统,借助微滴式数字PCR技术(droplet digital, ddPCR),有效实现靶向基因拷贝数的绝对定量,利用实时荧光定量PCR技术(real-time quantitative PCR detecting system, q-PCR),将扩增Ct值转化为基因拷贝数,再从基因拷贝数转换为肉的质量,有效实现了Ct值与质量间的转化,从而实现了羊肉中掺假鸡肉的精确定量。实验数据表明,该方法可以很好地应用于掺假羊肉中鸡肉质量百分比的检测,鸡肉的最低定量检测限(LOD)为5%,在5%～80%范围内相对误差小于±9%,相对标准偏差(RSD)小于±20%,定量结果准确、重复性高,可以有效区分生产污染与故意掺假,为肉类掺假的监管工作提供有力的技术参考。

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【部分图文】：

图1引物和探针的特异性实验

为建立羊肉、鸡肉基因拷贝数与Ct值之的关系，将已知基因拷贝数的羊肉、鸡肉核酸样品进行5个梯度的系列稀释，进行q-PCR检测，结果显示样品扩增Ct值均随着基因拷贝数的增加而减小，两者间具有着良好的线性关系，相关系数(R2)≥0.98(图3C;图3D)，扩增效率在90%～120%之....

图2阳性微滴与总微滴的比例

图1引物和探针的特异性实验图3鸡,羊的扩增图和标准曲线

图3鸡,羊的扩增图和标准曲线

图2阳性微滴与总微滴的比例1.3羊肉、鸡肉质量与基因拷贝数的关系

图4鸡肉质量与基因拷贝数的关系

以不同鸡肉质量含量的DNA作为模板，分别检测鸡、羊肉的扩增Ct值，按照公式1计算获得各混合样品中鸡肉所占的质量百分比。以鸡肉含量测量值和实际值为X、Y轴作图，当鸡肉含量在1%～80%范围内，实际值与测量值呈线性关系响应，相关系数r2为0.9946(图6)，线性关系良好，样品测....

本文编号：3979044