Th1细胞诱导胸腺上皮细胞凋亡及其机制的初步探讨

发布时间：2017-03-22 09:00

  本文关键词：Th1细胞诱导胸腺上皮细胞凋亡及其机制的初步探讨，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:初步探讨活化的Th1细胞诱导胸腺上皮细胞的凋亡和机制,以及强力霉素逆转其凋亡的机制,为临床重建T细胞免疫奠定实验室研究基础。方法:分选C57BL/6小鼠CD4+T细胞,经IL-12、IL-2和anti-IL-4诱导分化为Th1细胞。将诱导的Th1细胞或其上清分别与胸腺上皮细胞系MTEC1共育,加或不加anti-IFN-γ抗体处理,采用流式细胞术分析MTEC1细胞的凋亡水平。为进一步验证在炎症状态下活化的Th1细胞能否回迁到胸腺中,从而诱导胸腺上皮细胞凋亡,我们采用心脏内注射经CFSE荧光染料标记的Th1细胞,流式细胞术检测胸腺细胞中标记细胞的比例。不同浓度强力霉素处理与IFN-γ共培养的MTEC1细胞后,流式细胞术观察是否可部分或完全逆转细胞凋亡,最后利用免疫印迹技术检测Trx2、Bcl-2和Bax蛋白水平的变化。结果:经过Th1细胞或Th1细胞上清液处理的MTEC1细胞凋亡增加,而在体系中加入anti-IFN-γ抗体后,可部分逆转MTEC1细胞凋亡;Th1细胞回迁胸腺实验发现:胸腺中可检测到CFSE荧光染料标记的CD4+T细胞,证明活化的Th1细胞可以通过外周血循环回迁到胸腺中;通过初步的机制表明:经IFN-γ处理的MTEC1细胞凋亡比例增加,Trx2和Bcl-2蛋白水平被下调,Bax蛋白水平上调。在培养体系中再加入强力霉素后,MTEC1细胞凋亡有所逆转,且Trx2和Bcl-2蛋白水平增加。结论:外周炎症或其他情况下活化的Th1细胞可从外周回迁到胸腺,有可能部分通过分泌IFN-γ上调Bax,抑制Trx2和Bcl-2诱导胸腺上皮细胞凋亡,而强力霉素可上调Trx2和Bcl-2表达,部分逆转胸腺上皮细胞的凋亡。
【关键词】：Th1细胞 MTEC1细胞 IFN-γ 凋亡 Trx2
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R392
【目录】：

• 中文摘要5-6
• Abstract6-8
• 英文缩略表8-12
• 第一章 绪论12-19
• 1.1. 中枢免疫器官胸腺12-13
• 1.1.1. 胸腺的结构12
• 1.1.2. 胸腺微环境12-13
• 1.1.3. 胸腺中T细胞的发育13
• 1.2. 胸腺萎缩及对胸腺结构、微环境和T细胞的影响13-15
• 1.3. IFN-γ 与胸腺萎缩的关系15-17
• 1.3.1. IFN-γ 信号通路15-16
• 1.3.2. IFN-γ 与细胞凋亡16-17
• 1.3.3. IFN-γ 在胸腺萎缩时的作用17
• 1.4. 强力霉素的非抗生素作用17-19
• 第二章 研究目的、方法、实验设计和意义19-21
• 2.1. 研究目的19
• 2.2. 研究内容19
• 2.3. 研究方法19
• 2.4. 实验设计方案19-20
• 2.4.1. 体外验证Th1细胞可诱导MTEC1细胞凋亡19-20
• 2.4.2. 验证外周的Th1细胞可回迁到胸腺20
• 2.4.3. 探讨强力霉素对MTEC1细胞的保护作用20
• 2.5. 研究意义20-21
• 第三章 实验材料与方法21-36
• 3.1. 试剂与耗材21-24
• 3.1.1. 试剂21-22
• 3.1.2. 主要仪器和耗材22-23
• 3.1.3. 主要溶液的配制23-24
• 3.2. 实验方法24-35
• 3.2.1. 细胞培养24-29
• 3.2.2. MTEC1细胞凋亡检测29-30
• 3.2.3. 小鼠注射技术30-31
• 3.2.4. MTEC1细胞RNA提取及逆转录31-33
• 3.2.5. MTEC1细胞蛋白提取及蛋白印迹技术33-35
• 3.3. 统计分析35-36
• 第四章 实验结果及讨论36-57
• 4.1. Th1细胞的诱导及检测36-38
• 4.1.1. CD4+ T细胞分选36-37
• 4.1.2. Th1细胞的诱导37-38
• 4.1.3. Th1细胞的检测38
• 4.2. Th1细胞分泌IFN-γ 诱导胸腺上皮细胞系MTEC1细胞凋亡38-46
• 4.2.1. Th1细胞诱导MTEC1细胞凋亡38-40
• 4.2.2. Th1细胞上清诱导MTEC1细胞凋亡40-41
• 4.2.3. 阻断共培养体系中INF-γ 信号部分MTEC1细胞凋亡被逆转41-42
• 4.2.4. 阻断Th1细胞上清中INF-γ 信号，，MTEC1细胞凋亡减弱42-43
• 4.2.5. IFN-γ 促进MTEC1细胞凋亡43-46
• 4.3. 外周Th1细胞可回迁到胸腺46-51
• 4.3.1. 外周活化的脾细胞回迁到胸腺46-49
• 4.3.2. 外周活化的T细胞回迁到胸腺49-50
• 4.3.3. 外周活化的CD4~+ T细胞可回迁到胸腺50-51
• 4.3.4. 外周Th1细胞可回迁到胸腺51
• 4.4. 强力霉素部分逆转IFN-γ 诱导的MTEC1细胞凋亡51-54
• 4.4.1. 强力霉素抑制IFN-γ 诱导的MTEC1细胞凋亡51-52
• 4.4.2. IFN-γ 引起MTEC1细胞中Trx2和Bcl-2 蛋白下调，Bax蛋白上调52-53
• 4.4.3. 强力霉素可逆转IFN-γ 引起的Trx2和Bcl-2 蛋白水平下调53-54
• 4.5. 讨论54-57
• 第五章 主要结论及展望57-59
• 5.1. 主要结论57
• 5.2. 展望57-59
• 参考文献59-64
• 文献综述 胸腺萎缩64-71
• 1.增龄性胸腺萎缩64-65
• 2.病原体感染引起的胸腺萎缩65-66
• 3.化学物引起的胸腺萎缩66-69
• 参考文献69-71
• 致谢71-72
• 攻读硕士期间发表的文章和参加的会议72

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  本文关键词：Th1细胞诱导胸腺上皮细胞凋亡及其机制的初步探讨，由笔耕文化传播整理发布。

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