胶原蛋白基因col-131、col-150、col-121和dpy-5对秀丽隐杆线虫生殖与发育的影响

发布时间：2017-03-26 10:10

  本文关键词：胶原蛋白基因col-131、col-150、col-121和dpy-5对秀丽隐杆线虫生殖与发育的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：本论文通过分析5-氟尿嘧啶作用秀丽隐杆线虫以后基因的表达情况,利用RNA干扰技术研究基因的沉默表达对线虫生殖和寿命的影响,分析胶原蛋白家族基因在秀丽隐杆线虫生殖及其他生命活动中的重要作用,讨论5-氟尿嘧啶对线虫的作用机制。方法：利用高通量数字基因表达谱分析,筛选5-氟尿嘧啶作用后基因表达上调或者下调十分显著的基因,利用RNA干扰技术得到基因沉默表达型线虫,利用光学显微镜观察RNA干扰型线虫形态、产卵量及寿命变化,分析基因的功能及其在通路中的作用。结果：1.利用数字基因表达谱,筛选得到在5-氟尿嘧啶的处理下表达下调显著的col-131、col-150和dpy-5基因和表达上调显著的col-121基因；col-131、col-150和dpy--5基因属于ECM-receptor和Focal adhesion通路；col-121基因属于Focal adhesion通路。2.利用饲喂法,将人工构建的RNA干扰细菌喂食秀丽隐杆线虫,col-131、col-150、col-121和dpy-5基因表达量均显著降低,得到RNA干扰型线虫。3.apy-5基因RNA干扰型线虫身体短粗,表现出严重的生殖缺陷；col-121基因RNA干扰型线虫细长,生殖与发育受到影响；col-150基因RNA干扰型线虫产卵量和生存率都有所降低。4.col-131基因表达沉默对秀丽隐杆线虫生殖和寿命没有明显影响,但是col-131基因沉默可以减弱5-氟尿嘧啶对秀丽隐杆线虫生殖的毒性。col-131基因R,NA干扰型线虫可以在含有5-氟尿嘧啶的NGM培养基上产卵。当线虫col-131基因表达沉默以后,线虫的col-150、col-121和dpy-5基因表达量均降低。结论：本论文结果表明,col-150、col-121和dpy-5基因对秀丽隐杆线虫生殖的调节起到重要的作用。col-131基因可能是与5-氟尿嘧啶作用的靶点密切相关的基因,并且在ECM-receptor interaction通路和Focal adhesion通路中调节其他胶原蛋白家族基因的表达。
【关键词】：秀丽隐杆线虫 胶原蛋白基因 RNA干扰 5-氟尿嘧啶
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R383.1
【目录】：

• 中文摘要3-4
• Abstract4-9
• 第一章 前言9-15
• 1.1 5-氟尿嘧啶的研究进展9-10
• 1.2 秀丽隐杆线虫的研究进展10-11
• 1.2.1 秀丽隐杆线虫的生物学特征10
• 1.2.2 秀丽隐杆线虫作为模式生物的优势10-11
• 1.2.3 秀丽隐杆线虫在药物筛选方面的研究11
• 1.3 胶原蛋白家族基因与信号通路11-13
• 1.3.1 秀丽隐杆线虫胶原蛋白家族基因11-12
• 1.3.2 秀丽隐杆线虫ECM-receptor interaction通路和Focal adhesion通路的研究12-13
• 1.4 RNA干扰机制与应用13-14
• 1.4.1 RNA干扰的机制13
• 1.4.2 RNA干扰的应用13
• 1.4.3 秀丽隐杆线虫的RNA干扰方法13-14
• 1.5 本论文拟研究的问题和思路14-15
• 第二章 材料和方法15-29
• 2.1 实验材料、实验试剂和实验仪器15-16
• 2.1.1 线虫、菌株和质粒15
• 2.1.2 实验试剂15
• 2.1.3 实验仪器15-16
• 2.2 实验方法16-29
• 2.2.1 秀丽隐杆线虫的培养与同步化16-18
• 2.2.2 数字基因表达谱筛选18
• 2.2.3 提取秀丽隐杆线虫总RNA18-19
• 2.2.4 总RNA反转录及基因片段的扩增19-21
• 2.2.5 克隆载体的构建21-23
• 2.2.6 表达载体的构建23-25
• 2.2.7 dsRNA的表达25-26
• 2.2.8 RNAi秀丽隐杆线虫的鉴定26-27
• 2.2.9 基因缺陷型秀丽隐杆线虫生殖情况的测定27
• 2.2.10 基因缺陷型秀丽隐杆线虫寿命的测定27
• 2.2.11 利用DAPI染色,观察基因缺陷型线虫形态变化27-28
• 2.2.12 5-氟尿嘧啶作用基因缺陷型秀丽隐杆线虫28
• 2.2.13 统计学分析28-29
• 第三章 结果29-38
• 3.1 5-氟尿嘧啶作用以后秀丽隐杆线虫数字基因表达谱的筛选结果29-30
• 3.2 秀丽隐杆线虫总RNA提取结果30
• 3.3 col-131、col-150、col-121和dpy-5基因片段扩增的结果30-31
• 3.4 克隆载体的构建结果31-32
• 3.5 表达载体的构建结果32-33
• 3.6 IPTG浓度对RNAi效果的影响及col-131、col-150、col-121和dpy-5基因的RNAi结果33-34
• 3.7 RNAi型线虫形态观察34-35
• 3.8 RNAi型线虫产卵量的情况35-36
• 3.9 RNAi型线虫存活率情况36
• 3.10 RNA干扰型线虫暴露于5-氟尿嘧啶的生殖情况和基因表达的变化36-38
• 第四章 讨论38-41
• 4.1 胶原蛋白家族基因的功能分析38-39
• 4.2 col-131基因功能预测39
• 4.3 ECM-receptor interaction通路和Focal adhension通路的作用机制分析39-40
• 4.4 5-氟尿嘧啶对秀丽隐杆线虫生殖缺陷影响的机制分析40-41
• 第五章 结论41-42
• 5.1 主要结论41
• 5.2 研究展望41-42
• 参考文献42-47
• 综述：人类胶原蛋白的研究现状47-54
• 综述参考文献51-54
• 在学期间的研究成果54-55
• 附录一 英语缩略词汇表55-56
• 致谢56

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 谭晖,李一琴,张志伟,周秀田,曾希,曹建国;5-Fu抗结肠癌作用与细胞凋亡及P-gp蛋白表达的关系[J];南华大学学报(医学版);2005年03期

2 黄凤兰;孟凡娟;牛红云;张继星;;共抑制技术在花卉植物中的应用[J];内蒙古民族大学学报(自然科学版);2008年04期

3 余海浪;马文丽;周珏宇;孟伟;石嵘;郑文岭;;靶向COL1A1基因的shRNA对乳腺癌MDA-MB-231细胞体外侵袭与迁移的影响[J];基础医学与临床;2013年08期

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