胸腺素α原的生物学活性及DNA芯片分析研究

发布时间：2020-07-09 13:26

【摘要】： 人胸腺素α原（Human prothymosinα，ProTα）是一个在体内分布广泛，进化上高度保守的强酸性蛋白质，其相对分子量为1.3×10~4，基因定位于第2号染色体上，目前已有6个亚家族成员被克隆和测序。ProTα作为免疫调节因子具有多种生理功能，国外克隆出高加索人种的ProTα基因，其表达产物作为抗肿瘤的一种生物制品已进入了临床验证阶段。我们从中国人本身克隆出汉族人的ProTα基因，已被美国NCBI GenBank收录（Accession:AF170294）。新基因长度为300bp，编码100个氨基酸，在DNA水平与高加索人的有90％的同源性，推导的氨基酸序列与国外已克隆的ProTα有86.4％同源性，说明这是一个ProTα的新亚型。我们在原核系统中成功表达新ProTα基因的融合蛋白，分子量为3.7×10~4。经纯化鉴定后，对它的生物学功能作了进一步研究。以经原核系统表达并纯化的GST蛋白作对照品，发现本室融合表达的 ProTα蛋白可明显刺激人外周血淋巴细胞E—玫瑰花结形成率，最高浓度的ProTα（10~(-7)mol/L）的刺激率可达52.7％。 ProTα有显著的促细胞增殖作用。在无ConA作用下，单独ProTα以 10~(-7)、10~(-8)mol/L浓度明显刺激小鼠胸腺和脾细胞增殖（p＜0.01）；在与ConA 协同作用下，10~(-7)mol/L浓度的ProTα能明显促进胸腺细胞的增殖（p＜0.01），大于10~(-10)mol/L浓度的ProTα都能明显促进脾细胞的增殖（p＜0.01）。不论有无ConA，ProTα对两种细胞的促增殖作用有剂量依赖性。在ProTα影响细胞因子分泌的实验研究中，发现ProTα在一定剂量上可显著促进具有免疫调节活性的细胞因子IL-2和IFN-γ、炎症介导活性的 TNF-α、抗病毒活性的IFN-α的分泌。无论有无ConA，10~(-7)、10~(-8)mol/L浓度的ProTα均能促进小鼠胸腺和脾细胞分泌IL-2；10~(-7)mol/L浓度的ProTα 能促进IFN-γ的分泌；ProTα和ConA（5μg/ml）有协同作用，且均以10~(-7)mol/L 浓度最佳。在LPS（10μg/ml）的诱导下，与对照组相比，10~(-7)mol/L ProTα能有效地刺激小鼠巨噬细胞分泌TNF-α（p＜0.01）和IFN-α（p＜0.01）。为了考察在mRNA水平上ProTα对小鼠脾细胞的影响，我们应用MGEC 胸腺素口原的生物学活性及DNA芯片分析研究一405基因表达谱芯片进行了研究比较，发现 ProT a对七种基因有上调作用：蛋白酪氨酸磷酸酶基因p＊＊朋幻＊e＊BmMD：＊24700卜淋巴细胞抗原 6复合体（D86232X 增殖相关基因A（D21252卜多功能蛋白水解酶7的大亚基（X64449卜核糖体蛋白L6（NMOI 1290厂鼠6 号染色体BAC一 284H12（AC002397）、鼠E7．5胚胎文库肌蛋白CDNA（AW536575），等等。这些基因在与两种探针杂交时表现出较大的差异，且上下调趋势一致，程度相似。结果表明，新基因具有显著的免疫调节生物学功能，对许多疾病的治疗有潜在意义，这为我们下一步研究提供了理论基础。相信经过我们的努力，新的 ProT a蛋白可作为一种新的基因工程药物应用于临床。
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2001
【分类号】：Q574;Q78

【参考文献】