人β-NGF基因在大肠杆菌与仓鼠卵巢细胞中的表达

发布时间：2020-07-09 21:33

【摘要】： 人β-NGF基因在大肠杆菌与仓鼠卵巢细胞中的表达神经生长因子(Nerve growth factor, NGF)是最重要的神经营养因子之一，在神经、免疫、造血、生殖及内分泌等系统均有重要生物学作用，尤其在神经系统中的作用已被公认。NGF对调节神经元的生长、发育、分化、存活及神经损伤的再生修复均具有重要作用，在Alzheimer’s病、脊髓损伤和外周神经病变等疑难性神经系统疾病中已证实有较好治疗效果。天然NGF可从表达丰富的人组织中直接提取，但操作中存在诸多问题，远不能满足临床用药的需要，且因为NGF是大分子蛋白，不易透过血脑屏障，故治疗受到限制。NGF分子的β链是具有NGF活性的小分子片段，能穿过血脑屏障。为了能寻求一种切实可行及表达高活性小分子NGF的生产途径，我们通过基因工程和细胞工程技术设计了两种NGF的体外重组方案。第一部分人β-NGF基因与原核表达载体PBV220-β-NGF的构建及其在大肠杆菌中的表达目的为β-NGF的基因制药选择一种新方法。方法设计一对特异引物，直接从人血细胞基因组DNA中PCR扩增出NGF基因片段，先克隆至PUC-T载体中，经过酶切获得NGF片段后再定向插入原核表达载体PBV220，将构建的重组体PBV220-β-NGF转化大肠杆菌DH5α，并将筛选的阳性克隆通过42℃诱导表达。结果人日一NGF基因在大肠杆菌与仓鼠卵果细胞中的表达中文摘要经限制酶酶切电泳和DNA测序证实，确为p一GF全长序列(约 380bp);全菌经SDS一队GE电泳和薄层扫描显示，p一NGF蛋白量占菌体总蛋白量20.7%。结论成功克隆p~NGF基因全长序列并在大肠杆菌中获稳定表达，其生物学活性有待于进一步研究。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2002
【分类号】：R346
【图文】：

电泳图,电泳图,产物

3438ObP一图1一4PBV220一旦一NGFPCR产物电泳图Fig.1一4AgaroseFromgeleleetroPhoresisofPCRProduetsPlasmidPBV220一旦一NGFLanel:GeneRulerTMIO0bpDNAladder(11laddersfromuptodownare1000，900，800，700，600，500，400，300

电泳图,电泳图,产物

380bP一图1一3重组构建体PBV220一p一NGF双酶切电泳图Fig.1一3IdentifieationofPBV220一p一NGFbyenZymedigestionLanel.DNAmarker(fromuPtodown:21227/5148or4973/4269/3530/2027门904八587/1375/941/831/564八25)Lane2.PBV22O一旦一NGFBamHI+XbalLane3.UndigestedPBV22O一p一NGFPlasmid.3438ObP一图1一4PBV220一旦一NGFPCR产物电泳图Fig.1一4AgaroseFromgeleleetroPhoresisofPCRProduetsPlasmidPBV220一旦一NGFLanel:GeneRulerTMIO0bpDNAladder(11laddersfromuptodownare1000，900，800，700，600，500，400，300

电泳图,产物,电泳图,电泳

【参考文献】