NF-κB和AP-1活性变化及其在内毒素诱导IL-6基因表达中的调控作用

发布时间：2020-08-05 07:17

【摘要】： 枯否细胞(Kupffer cells，KC)是机体拮抗内外源性感染的主要防御细胞，同时，KC作为局部和全身性炎症反应的重要效应细胞，在脓毒症肝损伤的发病机制中发挥着关键作用。近年研究表明，核转录因子在内毒素(Endotoxins，ET)诱发炎症反应过程中具有重要的调控作用，其对炎症的调控主要通过调控炎性细胞因子的表达来实现，其中KC中的主要转录因子是核因子-κB(Nuclear factor-κB，NF-κB)和活化蛋白-1(Activator protein-1，AP-1)。本研究采用凝胶电泳迁移率变动分析法(Electrophoretic mobility shift assay，EMSA)和酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)来探讨：1．KC中NF-κB和AP-1在内毒素肝损伤过程中活性的动态变化及吡咯啉烷二硫代氨基甲酸盐(Pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC)对其活性的影响。2．内毒素肝损伤过程中，肝组织中促炎细胞因子白细胞介素-6(Interleukin-6，IL-6)水平的动态变化，PDTC对其释放量的影响及其与NF-κB、AP-1活性的关系。通过上述研究，旨在从分子水平上探讨内毒素诱发炎症反应过程中，KC内主要转录因子NF-κB、AP-1活性的变化规律及其在促炎细胞因子IL-6基因表达中的调控作用，以明确调控炎症介质相关基因表达中的关键调控元件，从而为有效控制炎症提供一个切入点。主要结果与结论如下： 1．采用EMSA检测内毒素所致小鼠肝损伤过程中NF-κB活性，结果发现，KC中NF-κB活性与LPS处理3h的量效关系为：1mg/kg LPS组即可观察到NF-κB活性，5mg/kg LPS组达峰值，10mg/kg LPS组仍可维持高活化状态；用5mg/kgLPS处理后的时效关系为：0.5h即可检测到NF-κB活性，3h活性明显增强，并可持续到至少8h；PDTC对NF-κB活性有明显抑制作用。 2．采用EMSA检测内毒素所致小鼠肝损伤过程中AP-1活性，结果发现，KC中AP-1活性与LPS处理3h的量效关系为：1mg/kg LPS组即可检测到AP-1活性，5mg/kg LPS组活性与1mg/kg LPS组相比稍有减弱，10mg/kg LPS组又明显增强，三剂量组n上活性与对照组相比均显著增强；用sing／kgLPS处理后的时效关系为：0．sh即可检测到 AP－1活性，lh达峰值，3h减弱后，5 h增强，sh又有所减弱，表现出明显的波动现象，但各时相点AP－l活性均显著强于对照；PDTC 对AP活性有明显促进作用。 3．本研究还进一步采用ELISA测定了内毒素所致肝损伤过程中，肝组织内 IL－6水平的动态变化。结果发现，内毒素的不同剂量和作用的不同时间肝组织内 IL－6水平均表现为先升高后降低的变化趋势，且各处理组均明显高于正常对照； PDTC能明显抑制IL．6的释放。相关分析显示IL6水平的变化与NFxB活性变化呈显著正相关，与AP－l活性变化则无明显相关性。提示，NFth对IL－6的表达可能具有一定的调控作用，而AP－l可能并不参与IL七表达的调控。 4．本研究结果表明，PDTC作为一种抗氧化剂，能通过抑制LPS引起的NF－h 的活化过程而阻断炎性细胞因子IL－6基因的表达，因而抗氧化剂有可能成为炎症疾病治疗中一类很有应用前景的药物。
【学位授予单位】：西南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2001
【分类号】：R363

【参考文献】