PWM对外周血B细胞CD43表达及抗体分泌的影响

发布时间：2020-09-08 22:49

　　前言 1981年Parkman发现CD43表达异常与X连锁的隐性遗传病——Wiskott-Ablrich密切相关。1990年Ardman等在HIV-1感染的患者体内检测到抗CD43的自身抗体引起了人们对CD43的进一步关注。2000年文献报道在HIV患者外周血T细胞表面CD43表达异常，电泳迁移率改变，并发现其在HIV特异反应中起重要调节作用。 CD43抗原已经被克隆，但它与其它已知的蛋白质没有同源性。CD43基因定位于16P11.2带。最近的研究表明染色体16P12-11带可以增强IgE变态反应。而CD43基因编码区定位于此区域。推测其可能在人类浆细胞、T、B细胞调节中起重要作用。由于在多种免疫缺陷病中发现了CD43的表达异常，因此CD43已被列为变态反应的候选基因。 CD43(leukosialin)，又名涎福林(sialophorin)。是完整的细胞膜表面粘蛋白。表达于胚胎期的卵黄囊细胞、胎儿肝细胞、骨髓细胞。成年期表达于骨髓造血干细胞。除静止B细胞以外的所有白细胞。CD43还表达于组织巨噬细胞、树突状细胞、上皮细胞、内皮细胞。在淋巴瘤细胞、某些类型的白血病以及实体瘤细胞表面也有表达。鉴于CD43如此广泛的分布，推测其在细胞之间相互作用，免疫调节中扮演重要的角色。但目前对CD43的研究尚未全面开展，有必要对其进行深入研究。实验材料与方法 1．常规法分离外周血单个核细胞：无菌取血，肝素抗凝，淋巴细胞分离液分离。吸取界面单个核细胞。 2．培养细胞：10％FCS调整细胞为 IX”／Inl备用。实验组加PWM，对照组不加PWM。 3．荧光抗体标记：每份细胞分为两份，其中一份加人PE－＊D19和＊＊C－C＊＊，另一份加人1吕q－＊E和1＊；－N＊C。 4．7＊0检测：OH oilest软件获取细胞，计数一万个细胞，得出CD43”CD19”＊）细胞占总CD19 ＊细胞的比例。 5．EllSA测定上清中IgG＊gM抗体的含量：结果 CN3”CD19”／CD19”B细胞tb率48 ／J’时实验组与对jR组有显著差异，P＜O．00。24小时s6小时实验组与对照组均无显著差异，P＞O．05。1M上68小时未加＊＊M对照组B细胞凋亡，达不到流式要求浓度故未上机检测．实验组 CD43T”／CD19T细胞比率 48小时与其它培养时段之间有显著差异，P③．00，实验组的小日、96小日、1纠小时、168小时之间无显著差异。P＞O． 05。对照组各培养时段之间无显著差异。 PwM诱导系统内屹 J 的分泌量均显著高于对照组。 I＞G＊＞M抗体分泌与 CD43表达之间无相关性汀＞0．05人培养 48小时通过倒置显微镜照相观察到抗CD43抗体可引起PBMC聚集。 4．PWM＋抗 CD43抗体诱导系统内屹M＊分泌与 PWM诱导系统内抗体分泌无显著差异，P＞0．05。讨论据报道用抗CD43的单克隆抗体证实不同分化阶段的B细胞可分为CD43T细胞或CD43＊细胞两群。因此有人推断CD43” B细胞如同CDS飞细胞一样代表一个独立的B细胞系。本实验表明 B细胞在PWM刺激下于培养第二天 CD43表达明显增加，这 ·二· 一结果表明，CD43属于在B细胞激活、分化时表达增加的膜分子。从前的实验用单标测荧光强度变化证实这一观点。本实验首次用流式双标记方法从测定CD43丫”细胞百分率变化的角度同样证实CD43飞细胞代表一个独立的B细胞群的提议不成立。为准确测得B细胞表面CD43表达频率，本实验每份细胞均分为两份，每份标本均设自身对照。可以将非特异染色降低到最低限度。 M．Wiken等到报道用TPA或抗CD40单克隆抗体刺激外周血 B细胞（在自体T细胞和5％单核细胞存在下人用抗CD43抗体间接标记方法测得CD43”B细胞百分率为12％－80％。此百分率由于用间标方法测得，实质上为所有培养细胞出细胞所有发育阶段，其中包括一部分T细胞和单核细胞儿D43”细胞的百分率。间标方法尤其不能回避培养时间过长，非特异染色过重的弊端。为准确反映B细胞各发育阶段并与当前流式诊断的方法接轨，本实验采用双色荧光标记测得CD43丫”细胞的百分率，用直标方法测得的CD43T细胞百分率数值相对于以往用间标方法则测得的整个B细胞发育阶段的数值低。分析可能存在如下原因出细胞进入浆细胞阶段将丢失大部分表面标记（包括CD19人PWM 刺激B细胞最终分化为淋巴母细胞。浆细胞阶段CD43”B细胞百分率极高。而CD43丫D19“细胞将不能涵盖CD43”浆细胞细胞的百分率。PWM是T细胞依赖的B细胞激活剂，据细胞体外活化分裂周期，静止期的细胞在体外经有丝分裂原的活化后，从 G。期进人G；期，进一步进人S期经历了72小时，而后再分化成浆母细胞进而成为浆细胞分泌抗体，因此，本实验证实PWM引起的 CD43表达增加发生于细胞的活化和增殖阶段。可以用于特异性鉴别浆细胞的表面标志极少，BD2000年的流式期刊推荐用荧光标记的CD38和CD19单抗可准确鉴别浆细胞。 CD38在浆细胞表面强烈表达，但CD38并非浆细胞特有的标志， ·3· 它同时激活T细胞表面表达，但?
【学位单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2002
【中图分类】：R392

【共引文献】