雨蛙素联合脂多糖致小鼠重症急性胰腺炎模型的研究

发布时间：2020-09-19 22:54

　　背景和目的临床上的重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)属病理分型的急性出血坏死型胰腺炎(acute hemorrhagic and necrotizing pancreatitis，AHNP)。本病起病急，病情凶险，病理上以广泛的胰腺坏死和出血为特征，其临床预后差，常合并胰外多器官损害或功能障碍，或出现胰腺局部脓肿、假性囊肿。在以往研究中，建立SAP动物模型，通常采用胰管结扎、胰管内或胰腺被膜下注射牛磺胆酸钠等方法。然而，上述方法均属创伤性，且手术有一定难度，动物死亡率高。Lampel等首次报导应用雨蛙素建立非创伤性急性胰腺炎水肿型(acute pancreatitis，AP)大鼠模型。此后，雨蛙素致AP动物模型广泛应用于胰腺炎的实验研究。然而，该模型的病理特征仅为轻型AP，不能形成SAP。本实验采用雨蛙素(Caerulein，Cn)联合脂多糖(Lipopolysacchride，LPS)腹腔内注射，建立一种非创伤性的小鼠SAP模型。材料和方法 1．动物和分组：NIH小鼠32只，雌性，体重25.0±3.0g，随机分为4组：Cn+LPS组、Cn组、LPS组和生理盐水(NS)组，每组8只。2．模型制作：受试动物于实验前禁食18小时，自由饮水。Cn+LPS组：雨蛙素50μg/kg·h×6，在末次雨蛙素注射后，即向腹腔内注射脂多糖10mg/kg；Cn组雨蛙素50μg/kg·h×6；LPS组生理盐水50ml/kg·h×6，在末次生理盐水注射后，即向腹腔内注射脂多糖1Omg/kg；NS组生理盐水50ml/kg．h×6。3．血清学检查：药物注射完毕后3小时采血，取血清，用碘一淀粉比色法测定淀粉酶含量，用硝酸还原酶法测定NO浓度。4．取材：采血后处死小鼠，取胰腺称湿重。分别取胰组织置4℃2.5％戊二醛溶液和10％甲醛溶液固定，部分胰组织置-70℃冰箱保存，备用待测。取胰外器官包括胃、回肠末端、肝、肾、脾、心、肺，置入10％甲醛溶液固定。5．胰腺组织SOD和MDA检测：制备10％胰腺组织匀浆，双缩脲浙江人学倾】：学位论义法测蛋白定量，黄噪吟氧化酶法测 SOD，硫代巴比妥酸（TBA）法测 MDA。6．光镜标本制样观察：组织经ICh甲醛固定，石蜡包埋，切片，常规苏木素和伊红染色，光镜观察。 7．透射电镜标本制样观察：把胰腺组织修剪成 lmm’大小的组织块，2．5％戊l醛b！l％饿酸双闲定，2％醋酸铀块染，梯度乙醇和丙酮脱水，Epon 812包埋，超薄切片，醋酸钠和拘橡酸铅双重染色，PhilipS TECNAI 10透射电镜观察，加速电压80 KV。8．胰腺组织病理学评分：用双盲法按S。hmidt’s标准评分。9．统计学处理：两样本均数差异山t检验，数据川IISD表示；分值等级差异川Afdlt分析，数据川样本例数表示。结果1．小鼠胰腺和胰外纽织人体观察：Cn＋LPS组：小鼠腹腔有腹水利少量皂化斑；胰腺肿胀，可见多处皂化斑点羽；少植出血点；胰外器官多处改变，肖肠扩张，肠腔积气积液，有小肠套迭，脾色暗红，体积增人厂肾包膜卜偶可见出血斑点；肝色变暗，略显肿胀。Cn i胰腺水肿。LPS i和 NS i均无异常改变；2．胰腺组织病理变化和病理学评分：Cn＋LPS组：胰腺山现严重的水肿、坏死和炎症浸润，并出现不同程度的出血。Cn 组：胰腺出现显义的间质水肿和轻中度的炎症浸润，但没有明显的实质坏死利出血。LPS 纽：胰腺轻微水肿，有炎症浸润，无出血坏死。NS组止常。3．胰腺腺泡细胞超微结构变化：Cn＋LPS组扩张的内质网形成同心性膜性小体（COflC6ntriCme。bf。lOUS bodleS），线粒体主泡化，酶原颗粒明显减少，胞质山人量空泡形成。Cn组粗面内质网轻微扩张，线粒体轻度肿胀，酶原颗粒减少，胞质内可见少挝囱噬性空泡。LPS组胞质山有少量主泡出现。NS组止常。4．胰外重要器官病理变化：Cn＋LPS组出现多器宫损害。Cn钒：各器官组织均止常。LPS组：心、肺、肾、肝等器官内可见少量炎症浸润。NS组：止常。 5．胰腺湿巫测定：Cn＋LPS组胰腺湿重升高明显，与对照组和 LPS组比较，结果有差异（P＜0．of和 P＜0．05）。Cn＋LPS组和 Cn组之间比较，差异无统计学意义。6．血淀粉酶检查：Cn＋LPS组血淀粉酶值升高达对照组的 5倍以上，与对照纽和 LPS组比较，均有显 3 浙江人学邱上学位论义义性差异（P＜0．of）。Cn＋LPS组与Cn组比较，有统计学意义（P＜0．05）。7．血消NO浓度： Cn＋LPS组的血淌NO浓度明显升高，与其他三组比较，均有显著性差异（P＜0．of）。Cn 纽血消NO浓度正常。LPS组血清NO浓度增高明显，与对照组比较，有显著性差异（P＜0
【学位单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2002
【中图分类】：R-332

【参考文献】