紫外辐射对人角质形成细胞的细胞周期调控的影响

发布时间：2020-09-21 14:04

【摘要】： 目的 建立紫外辐射损伤人角质细胞(HaCaT细胞株)的模型。研究UVB对细胞周期的进程和细胞凋亡情况，并研究了维生素E(VE)对紫外照射的保护作用以及相关基因p53和bc1-2在这些作用下的表达。方法采用细胞培养、MTT染色法、流式细胞技术、western蛋白免疫印迹法等技术观察不同剂量UVB照射下培养不同时间后的HaCaT细胞存活率、细胞周期分布及凋亡的发生以及加入抗氧化剂后的情况，以及上述情况下p53、bc1-2表达的变化。结果 1．UVB剂量不同，培养时间相同时，随剂量增加，存活率逐渐减少；照射剂量相同，培养时间不同时，随时间延长，细胞存活率下降到最低值后有恢复(照射15min除外)。2．细胞周期结果分析表明：小于5min的UVB照射剂量，随着细胞培养时间的延长，细胞增殖指数：{(S+G2)／(G1+S+G2)}不断提高；大于或等于5min的照射剂量，随培养时间延长细胞增殖指数逐渐减少。UVB以时间剂量依赖方式抑制HaCaT细胞增殖能力。3．无论是从形态学还是流式细胞图我们发现HaCaT细胞在正常情况下也存在细胞凋亡。4．随UVB剂量增加，培养时间相同时，凋亡率逐渐增加；照射剂量相同，随培养时间延长，凋亡率也逐渐增加。5．VE对UVB照射所致的HaCaT细胞生长抑制有保护作用，40μg／ml为VE最佳剂量并且予照射前和照射前后加入保护作用更佳。6．加入VE后对UVB照射后的PI值明显升高，细胞凋亡率降低了约50％。7．UVB诱导HaCaT细胞中p53和p-p53(Ser15)的表达增强，p53在照射后12h达峰值；p-p53的表达维持12h。bc1-2表达显著降低，照射后24h内都维持较低水平。8．VE的加入使UVB诱导HaCaT细胞中p53基因表达下降，检测不到p-p53(Ser15)的表达。而bc1-2表达量增加，随培养时间延长bc1-2逐渐下降。结论UVB在一定的照射剂量和培养时间内抑制人角质细胞的生长。UVB诱导HaCaT细胞发生G1期为主的细胞周期阻滞以及细胞凋亡。VE对此有拮抗作用。p53、p-p53(Ser15)和bc1-2的基因表达在UVB诱导的损伤反应中起一定作用。bc1-2参与了VE对UVB的损伤保护作用。
【学位授予单位】：中国人民解放军第一军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：R363

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本文编号：2823577