重组人骨形成蛋白-2在大肠杆菌中的高效表达及体外复性

发布时间：2020-09-24 20:25

　　 骨形成蛋白—2(Bone Morphogenetic Protein-2，BMP-2)是骨形成蛋白家族成员之一，具有多种生物学功能，在体内不仅可以诱导骨的形成，而且还是胚胎发育阶段必需的细胞调节因子，因此在临床应用具有广阔的前景。 本实验采用分子克隆技术，PCR扩增技术和DNA点突变技术，将人骨形成蛋白—2基因构建到pET35b(+)质粒上，转化到BL21(DE3)，构建的大肠杆菌菌株JH通过IPTG诱导表达重组人骨形成蛋白—2。对重组大肠杆菌JH菌株培养特性和表达研究后，确定了表达菌株JH最佳表达人骨形成蛋白—2条件。IPTG诱导表达重组人骨形成蛋白—2以包涵体的形式存在。本实验通过DEAE离子交换层析得到高纯度的包涵体后，对包涵体变性溶解在氧化—还原(还原型和氧化型谷胱甘肽)复性系统中，简单的稀释方法复性得到二聚体。最后经过肝素亲和层析一步纯化法，得到高纯度的重组人骨形成蛋白—2二聚体和单体。在活性检测实验中重组人骨形成蛋白—2二聚体形式明显地诱导C2C12细胞产生碱性磷酸酶，表明了重组人骨形成蛋白—2具有很高的活性。由于rhBMP-2属于TGF-β超家族，在序列上它们有高度同源性，具有高度保守Cys-knot结构，所以rhBMP-2包涵体成功复性的方法，可能适合于TGF-β超家族的其他成员。同时，本实验设计的复性工艺简单易行，从而得到了大量的有活性的rhBMP-2，因此该工艺也为实现重组hBMP-2的大规模生产创造了条件，对hBMP-2生物特性的研究和临床上的推广应用也具有重要的意义。
【学位单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2004
【中图分类】：R346

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本文编号：2826233