应用HIV-1特异性表位多肽HLA-Ⅰ类分子四聚体分析HIV-1感染者体内特异性CTLs的研究

发布时间：2020-09-24 22:17

　　 目的：评价HIV-1特异性CTLs在HIV-1感染中的免疫反应，并对HIV-1特异性抗 原表位多肽CTLs进行定量和功能方面的研究。方法：应用基因克隆、蛋白质表达 和纯化等分子生物技术制备人HLA-A*0201限制的HIV-pol 294-302YI9 (YTAFTIPSI)Tetramer，商品化HIV-gag 77-85 SL9(SLYNTVATL)Tetramer，HIV-pol 476-484 IV9(ILKEPVHGV)Tetramer购自ProImmune，并应用三种Tetramer检测 14例HLA-A*02阳性的HIV-1感染者外周血中的HIV-l表位多肽特异性CTLs的频 度，同时采用SL9(SLYNTVATL)体外冲击HIV-1感染者的PBMCs，通过ELISPOT 和ICCS方法检测产生IFN-γ的病毒特异性CTLs，初步分析特异性CTLs在HIV-1 感染中的作用。结果：Tetramer SL9、 IV9和YI9检测出病毒特异性CTLs占CD8+ 的百分比范围分别为：0． 06％-3． 27％；0． 05％-0． 57％和0． 09％-0． 66％，其检出阳性 率分别为11／14、 10／14和5／7。ELISPOT和ICCS检测的产生IFN-γ的细胞近似， 但远低于Tetramer检测出的病毒特异性CTLs数量。ELISPOT和Tetramer所检测 出的HIV-1表位多肽特异性CTLs频度之间有相关性(r=0． 8455，P0． 01) 。ICCS 检测的CD8T细胞中产生IFN-γ与ELISPOT检测产生IFN-γ的细胞结果一致。结 论：Tetramer可以方便敏感地检测出HIV-1表位多肽特异性CThs。ELISPOT和ICCS 是研究CThs功能的重要手段。高频度的HIV-1表位多肽特异性CD8+T细胞在感染 者体内不同病毒载量水平上以及疾病进展的各个时期都有存在，但多于95％的 Tetramer阳性的细胞是没有细胞毒性的。联合使用三种方法可以更精确地评价 HIV-1感染者体内CTLs的数量、功能的动态变化，对于深入了解特异性CTLs在病 毒性感染中的作用，提供了有效的平台。探索恢复CTLs功能的机制，可以为细胞 免疫治疗提供实验基础。
【学位单位】：中国人民解放军军事医学科学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2004
【中图分类】：R392
【部分图文】：

图2.HLA重组重链和轻链分子的表达和初步纯化(12%SDS一以GE鉴定结果1一2.A*0201菌体裂解物和包含体(33KD);3一4.A*1101菌体裂解物和包含体(33KD);5.睦对照(BL一21);6一7.p一ZM菌体裂解物和包含体(lZKI));M.标准物

图2.HLA重组重链和轻链分子的表达和初步纯化(12%SDS一以GE鉴定结果1一2.A*0201菌体裂解物和包含体(33KD);3一4.A*1101菌体裂解物和包含体(33KD);5.睦对照(BL一21);6一7.p一ZM菌体裂解物和包含体(lZKI));M.标准物

PPLC对复性后的多肤SIC分子的纯化

【共引文献】

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本文编号：2826350