人脐血管内皮细胞的胞间通讯及其分泌蛋白质检测的初步研究

发布时间：2020-10-01 16:19

　　内皮细胞对血管的调控作用近年来受到人们的广泛关注。在人体的各种血管中，根据其是否有神经支配，可以分成无神经支配血管和有神经支配血管两类，这两类血管的调控机制存在差异，内皮细胞在这两类血管的调控中起的作用也不一样。故研究内皮细胞对血管的调控机制，应该区分所要研究的血管有无神经支配，而目前人体有、无神经支配的血管模型少见报道，有关无神经支配血管的调控机制的报道也为数不多。本研究拟用HE染色、电镜、免疫组化、免疫荧光、RT-PCT、划痕负载染料迁移等方法研究人肠系膜下动脉的分支血管及脐血管的细微、超微结构以及血管壁中多种肽能及单胺能神经纤维的分布，拟用其建立人有、无神经支配血管模型，并对无神经支配的脐血管的调控机制进行探讨。大量的研究表明，内皮细胞合成、分泌的物质还有很多为我们所不知，为了更好的了解无神经支配的脐血管中内皮细胞正常的生理功能，有必要对其分泌的物质作一个总体分析。本研究的另一目的拟收集、浓缩HUVEC的无血清培养上清，采用毛细管电泳检测其中蛋白质的种类、含量，经蛋白质低温层析对其中的蛋白质进行分离纯化，并对它们的性质、功能进行初步探讨。本研究取得的主要结果如下： 1.用HE染色方法观察人脐血管和肠系膜下动脉的分支血管的结构，我们发现脐动脉和与其直径相当的肠系膜下动脉的分支在结构上存在一些差别。和肠系膜下动脉的分支相比，脐动脉中膜平滑肌的层数明显较多，管壁较厚而管腔较小。平滑肌的排列方式也存在差异，肠系膜血管的中膜平滑肌几乎均呈环行排列，在脐动脉中，中膜平滑肌的外层也呈环行排列，而靠近内膜的平滑肌细胞的排列方向则是朝向血管腔面。在电镜观察这些血管的内皮细胞的结构时发现，脐静脉内皮细胞中有丰富的粗面内质网、线粒体和发达的高尔基体，提示其有活跃的合成蛋白质的功能，而在脐动脉和肠系膜分支动脉的内皮细胞中，除较多线粒体和发达的高尔基体外，粗面内质网较少见，却有异常丰富的滑面内质网，其功能意义尚不清楚。 2．利用兔疫组化方法证实，在人肠系膜下动脉的分支血管管壁中存在U ＊NPY、SP等肽自及5叫T单胺商的神经纤维，这些纤维主要分布于血管的外膜及中外膜交界处，而在脐血管的中外膜中未见这些神经纤维，该结果提示，前者可以作为有神经支配的人血管模型，而后者可以作为无神经支配的人血管模型。 3．采用兔疫组化、免疫荧光的方法证实在体和离体的脐血管内皮细胞中均表达eNOS、VIP、SP、NPY，提示脐血管内皮细胞能通过巳DRF途径或旁分泌多种VPS途径来调控脐血管的张力。 4．用免疫荧光、RT－PCR方法证实HUVEC能表达CX43蛋白及 mRNA；在划痕负载染料迁移实验中我们发现，小分子量的荧光黄染料能从划伤的细胞转移到正常的细胞中去，该实验证实HUVEC能通过缝隙连接来传递一些小分子物质，为HUVEC之间经缝隙连接实现直接通讯提供了重要的形态学证据。 5．用毛细管电泳方法检测人脐静脉内皮细胞株eec304细胞的无血清培养上清，发现其中有多种蛋白质成分，根据其分子量大小主要分成6个区带。经蛋白质低温层析分离出其中3种蛋白质，分子量依次为13、17、70kD，其中分子量为13、17kD的物质对内 Vlll 皮细胞的生长有促进作用，而分子量为70kD的物质对细胞的生长末见明显影响。本实验结果表明，人肠系膜下动脉的分支血管的管壁中有肽能及单胺能神经纤维的分布，而脐血管中则没有这些神经纤维，前者可以作为人有神经支配的血管模型，而后者可以作为人无神经支配的血管模型。在无神经支配的脐血管中。内皮细胞可以通过两种胞间通讯的方式调节脐血管的功能：通过旁分泌NO及多种VPS途径来调节血管张力；通过缝隙连接途径来在相邻内皮细胞间传逸信息以及保持内皮细胞功能的同步性。人脐静脉内皮细胞能合成、分泌多种蛋白质成分，它们的功能多样，其中分子量为13kD、17kD 的物质有促进内皮细胞增殖的作用，而分子量为70kD的物质对内皮细胞的生长未见明显影响，这些物质更多的性质和功能还需要进一步的研究。
【学位单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2001
【中图分类】：R329.2
【文章目录】：
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英文摘要
中文摘要
论文正文：人脐血管内皮细胞的胞间通讯及其分泌蛋白质检测的初步研究
    总前言
    本实验中使用的主要试剂来源
    第一部分有、无神经支配的人血管模型的建立以及内皮细胞分泌血管活性物质实现对人脐血管的调控
        一、有、无神经支配的人血管模型的建立
        二、体外培养的HUVEC分泌血管活性物质的研究
        三、讨论
    第二部分人脐静脉内皮细胞之间缝隙连接的研究
        一、材料与方法
        二、结果
        三、讨论
    第三部分 HUVEC无血清条件培养液中蛋白质的初步检测
        一、人脐静脉内皮细胞株ecv304细胞无血清条件培养液中蛋白质的分离与检测
        二、 N01、N08、N012对ecv304细胞生长的影响
        三、讨论
全文总结
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论文参考文献
文献综述内皮细胞的胞间通讯
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