组织转谷氨酰胺酶在肝细胞损伤和增生中的双向调控机制的研究

发布时间：2020-10-23 05:50

　　 目的：探讨tTG在肝细胞损伤和增生中的表达和分布规律，揭示tTG的双重作用机制，丰富信号转导方面的研究内容，为肝脏疾病的防治提供新的理论依据。 方法：以大鼠原代肝细胞为材料，给低浓度乙醇制造肝细胞损伤模型。同时另设防治组分别给PNLP、Putr、CsA，检测其对乙醇引起的肝细胞损伤的影响。在倒置显微镜下观察不同处理组细胞的生长情况；通过MTT比色法检测肝细胞增殖活性；用Hoechst荧光染色法观察细胞凋亡现象；运用免疫细胞化学法测定不同处理组细胞的tTG的阳性表达率；运用Western blot分析方法检测tTG在细胞内不同部位的分布情况。 结果：1．MTT比色显示：用200mM浓度的乙醇处理大鼠原代肝细胞24h后，细胞群增殖活性明显受抑制，与正常对照组比较统计学上有显著性差异(P＜0.01)，而PNLP(200uM)，Putr(100uM)，CsA(10uM)可使细胞群增殖活性回升，尤在PNLP组及CsA组细胞增生活跃，与乙醇组比较统计学上有显著性差异(P＜0.01)。2．Hoechst荧光染色检测细胞凋亡计数结果：在50mM乙醇处理18h后大鼠肝细胞已有较多凋亡细胞可进行形态学观察，其凋亡细胞率分别为乙醇组15.4％，PNLP(200uM)组9.3％，Putr(100uM)组5.4％，CsA(10uM)组4.6％，正常对照组2.9％。乙醇组显著高于其余各组(均有统计学意义，P＜0.01或P＜0.05)。3．tTG免疫细胞化学图像分析：用50mM浓度乙醇处理大鼠肝细胞18h后，tTG蛋白表达已有显著增高，各组积分光密度不同，乙醇组97.632，PNLP(200uM)组103.87，与正常对照组(64.557)相比 延边大学医学院硕士学位论文 显著增高(均有统计学意义，P0.01);而Putr(100uM)组54.595，CsA(10田随) 组40‘464，与乙醉组相比显著降低(均有统计学意义，P0.01)。4.细胞质蛋白 中tTG的W七stem blot分析:各种处理分别同时作用于大鼠肝细胞18h后提取细 胞质蛋白进行检测，其tTG的PAGE电泳条带的平均光密度测量值分别为正常 组0.81，乙醇(50mM)组0.90，PNLP(200uM)组0.84，Putr(lmM)组0.66， CsA(3uM)组0.77，CsA(suM)组0.75。乙醇组明显高于其余各组(除与PN毛P 组比较无统计学差异外，与其余各组比较统计学上均有显著性差异，P0.01或 P0.05)，且CsA组显示一定的负性剂量依赖关系。5.细胞核蛋白中tTG的 W七stem blot分析:各种处理分别同时作用于大鼠肝细胞18h后提取细胞核蛋白 进行检测，测量其tTG的PAGE蛋白电泳条带的平均光密度值结果不同，乙醇 (50mM)组为1 .02，高于正常对照组的0.9(统计学比较有显著性差异，P0.05); 而Putr(l mM)组为0 .74，显著低于乙醇组(统计学比较有显著性差异，P0.01)。 6.细胞膜蛋白中tTG的W七stem blot分析:各种处理分别同时作用于大鼠肝细 胞18h后提取细胞膜蛋白进行检测，其tTG的PAGE蛋白电泳条带的平均光密 度值分别为正常对照组a25，乙醇(100血M)组0.19，乙醇加PNLP (100n1M+200uM)组0.32，PNIP(ZO0uM)组0.33。乙醇加PNLP组明显高 于乙醇组及正常对照组(统计学上有显著性差异，P0.01或P0.05);乙醇组显 著低于正常对照组(统计学上有显著性差异，P005)。 结论:1.CsA可抑制乙醇引起的细胞质tTG的高表达及细胞凋亡的发生， 促进肝细胞增生，提示tTG参与细胞凋亡的机制与线粒体及细胞色素C密切相 关;2.乙醇引起的 tTG在细胞质中的高表达可使其本身向细胞核内转位，应用 Putr可抑制tTG向核内转位，从而减少细胞损伤:3.PN毛P可引起细胞增生及细 胞膜tTG的高表达，tTG的膜分布可抑制其在细胞质及细胞核中时引起的对细 胞的损伤作用，这可能与在有限表达量的范围内tTG的大量膜转移减少了细胞 质游离的tTG含量，从而降低tTG向核内转位有关;4.tTG的双重生物学活性 主要是通过在细胞内向不同部位的转移来发挥其不同活性和调节作用，促进细 胞凋亡的发生或参与细胞增生。
【学位单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2004
【中图分类】：R363
【部分图文】：

而用tTG交联活性抑制剂Putr与乙醇同时作用于细胞后，核内tTG的含量反而下降，与正常组相比下降达17.8%，与乙醇组相比下降达27.5%(统计学上有显著性差异，P<001)。(图16，图17)图16图17:不同处理引起的细胞核蛋白中t勺G含量的变化Figl7.Alte段donoftTGeontantineeUularnuclearOroteinatthediffe代ntt代atl”e爪

6.肝细胞膜蛋白中“G的westernblot肝细胞膜蛋白中tTG的队GE蛋白条带的平均常对照组0.25，乙醇组0.19，乙醇加PNLP组0.32，原代肝细胞18h后，tTG在膜蛋白中的含量明显降低，相比统计学上有显著的差异，P<0.05)，PNLP与乙用于细胞后细胞膜内分布的tTG含量显著增高，增%、73.7%(统计学比较有显著性差异，P<0.01)，28%、32%(统计学上有显著性差异，P<0.05或P<0.图18
【参考文献】

相关期刊论文 前4条

1 方敏,王晓东;细胞凋亡的线粒体通路[J];北京大学学报(医学版);2002年01期

2 杨连君,王文亮,司晓辉;乙醇诱导肝癌细胞凋亡及其单克隆抗体的制备[J];临床与实验病理学杂志;2001年03期

3 田昱,李平,朱运松,shmu.edu.c;降低细胞内tTG活性可使细胞获得对TNF-α的抗性[J];中国生物化学与分子生物学报;2000年03期

4 韦伟,龚建平,裘法祖;正常和异常肝组织增生中细胞增殖与凋亡的关系[J];中华实验外科杂志;2001年02期

本文编号：2852633