重组人白细胞介素-13介导原癌基因c-fos表达及其对Dami细胞分化的影响

发布时间：2020-10-30 21:24

　　 目的:研究重组人白介素-13(recombinant human interleukine-13,rhIL-13)介导原癌基因c-fos表达及其对巨核细胞系白血病Dami细胞株分化的影响。为IL-13的临床应用提供实验依据和奠定理论基础。方法:1.细胞增殖实验:(1)绘制Dami细胞生长曲线图;(2)MTT法测定对照组和rhIL-13组细胞吸光度值(A值),观察rIL-13对Dami细胞增殖的影响。 2.总RNA提取:取生长良好的Dami细胞1×109/L,经过20小时的血清饥饿后,以rhIL-13分别诱导30、60分钟和作用5代后,提取细胞总RNA,通过RNA电泳判断其是否符合实验要求。 3. RT-PCR:(1)检测Dami细胞IL-13受体α1(IL-13Rα1)的表达;(2)观察在rhIL-13分别诱导30、60分钟后,c-fos mRNA表达水平;(3)以 rhIL-13作用于Dami细胞并分传5代,检测Dami细胞上的表面标志物GPIIb及Glycophorin A(GPA) 的mRNA表达。 4.Western Blotting:取生长良好的Dami细胞,经过20小时的血清饥饿后, rhIL-13诱导30分钟,细胞以RIPA缓冲液裂解, Western Blotting检测Dami细胞的c-fos蛋白表达水平。结果:1. RT-PCR 结果显示,Dami细胞表达IL-13 Rα1。 2.rhIL-13诱导Dami细胞30分钟后,除空白对照组外,rhIL-13组、血清组(15%)和混合组(rhIL-13+血清)原癌基因c-fos的mRNA表达均增高,60分钟后,除血清组外,rhIL-13组和混合组c-fos mRNA表达均消失。 3.rhIL-13诱导Dami细胞5代后,Dami细胞的巨核细胞系表面标志物GPIIbmRNA表达增加。 4. rhIL-13诱导Dami细胞5代后,Dami细胞GPA mRNA表达增加。 5. rhIL-13诱导Dami细胞30分钟后,与空白对照组相比,rhIL-13 WP=4 组、血清组和混合组c-fos的蛋白表达明显增加。 6. MTT试验结果表明,rhIL-13组与对照组相比,其吸光度值无明显差异,rhIL-13对Dami细胞的增殖无显著性影响(P0.05)。结论:1. Dami细胞表达IL-13受体α1。2.rhIL-13诱导Dami细胞原癌基因c-fos表达。3.rhIL-13上调Dami细胞表面分子标志GPIIb和GPA mRNA 的表达,其机制与c-fos的表达相关。4、rhIL-13对Dami细胞的增殖无显著性影响。
【学位单位】：江西医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2004
【中图分类】：R392.1
【部分图文】：

ne 1 2 3 4图 4. RNA 琼脂糖电泳图。 rhIL-13 作用 Dami 细胞 30min，、rhIL-13 组、血清组、混合组（rhIL-13+血清）细胞，用 S

. Lane: 1 2 3 图 9. Lane: 1 2 3图 8. rhIL-13 上调 Dami 细胞 GPIIb mRNA 表达。Lane 1：对照组rhIL-13 组(100ug/L,Dami 细胞传 5 代)；Lane 3：marker。Fig8. rhIL-13 up-regulates expression of GPIIb mRNA in Dam
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本文编号：2863014