抗活化血小板表面受体全套单链抗体噬菌体展示文库的构建和筛选

发布时间：2020-11-05 03:14

　　 本研究从活化血小板免疫小鼠的脾淋巴细胞中分别克隆出小鼠免疫球蛋白的重、轻链可变区(V_H和V_L)基因，将V_H和V_L在体外拼接成单链抗体(ScFv)基因后转入噬菌体载体，使单链抗体分子展示在噬菌体表面，从而成功构建了抗血小板表面受体全套单链抗体噬菌体展示文库。以血小板膜表面数种受体糖蛋白(GP)Ⅱb、Ⅲa、Ⅱb／Ⅲa复合物及重组凝血酶受体PAR-1(rPAR1)为靶抗原从该文库中筛选各自的特异性单链抗体。靶抗原GPⅡb、GPⅢa、GPⅡb／Ⅲa以亲合层析方法从血小板裂解液中提取，rPAR1以重组蛋白的形式在大肠杆菌中表达，表达产物具有与天然PAR-1分子相似的活性和功能。 从文库中筛选出的单链抗体克隆经测序证实符合抗体可变区结构特点，对其中抗rPAR1的单链抗体克隆APAR31进行了表达，得到了有抗原结合能力的单链抗体分子，同时也证实了所建噬菌体文库的有效性。上述工作为噬菌体展示技术在血栓与止血领域的应用奠定了基础。
【学位单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2003
【中图分类】：R392.1
【部分图文】：

6KDaa，rPAR图5rPARIb.cleavedPePtidese.Proteinmarker经凝血酶酶切后15%SDS一队GE尿素胶电泳3.凝血酶酶切片断诱导血小板聚集试验凝血酶酶切后的板聚集，当浓度为sng/mL时出现血小板变形波，浓度40ng/mL集率65%(图6)。未酶切的rPARI不能诱导血小板聚集。1能诱导血小时达到最大聚
【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 许静;张磊;刁世勇;刘斌;孟磊;姜学英;韩忠朝;;B3HM细胞免疫小鼠脾细胞scFv噬菌体展示文库的构建及表达[J];中国生物工程杂志;2007年07期

2 许静;吴立华;徐洁;刘俊霞;孟磊;何一心;宋增璇;;特异性抗细胞表面分子单链抗体的分离和鉴定[J];中国免疫学杂志;2007年09期

3 唐勇,甄永苏;抗Ⅳ型胶原酶单链抗体的表达及其对肿瘤细胞侵袭的抑制作用[J];癌症;2001年08期

4 董军,黄强,兰青,周丽英,王爱东;PCR定点诱变改造低效价抗胶质瘤单克隆抗体的初步报告[J];江苏医药;2001年11期

5 章美云,杨青,赵莉,孔健;原核分泌型表达载体的构建及癌胚抗原单链抗体的表达[J];中华微生物学和免疫学杂志;1998年01期

6 王冠华,孔健;CEA单链抗体基因在大肠杆菌中的克隆及表达[J];中华微生物学和免疫学杂志;1998年06期

7 王字玲,邓健蓓,韩骅,陈萍,药立波,苏成芝;抗人黑色素瘤单链抗体基因的克隆和分泌型表达[J];中国生物化学与分子生物学报;1999年01期

8 杨卫东,李彪,朱承谟,杨冠珍,吴祥甫;抗癌胚抗原单链抗体与核心链霉亲和素基因的融合及在大肠杆菌的表达[J];上海免疫学杂志;2000年06期

9 廖楚航,王大章,杨西川,李扬,房思炼;抗人VEGF单链抗体基因的克隆及突变校正[J];实用医院临床杂志;2004年01期

10 唐珍洁,廖文君,余冰,钟继新,朱慧芬,叶庆,程欣,李文涵,沈关心;肝癌细胞特异性结合单链抗体三维结构的同源模建[J];生物物理学报;2005年03期

相关博士学位论文 前10条

1 胡学军;抗乙肝病毒表面抗原PreS1(20-47)单链抗体基因克隆及其在大肠杆菌和烟草中的表达[D];大连理工大学;2002年

2 田媛;前列腺癌细胞结合单链抗体的筛选、表达纯 化及其功能初步研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年

3 李月红;抗ICAM-1单克隆抗体与单链抗体的制备及其生物学特性研究[D];吉林大学;2005年

4 陈德宇;前列腺素D合成酶在男性生殖中的基础及应用研究[D];南京师范大学;2005年

5 熊盛;重组人源抗HBsAg单链抗体在大肠杆菌和巴氏毕赤酵母中的表达、纯化与性质鉴定[D];华南理工大学;2002年

6 邵长利;抗人红细胞单链抗体融合HIV-1gp41抗原肽双功能分子的制备与鉴定[D];中国人民解放军军事医学科学院;2007年

7 万忠海;抗PEA单抗和单链抗体制备及在绿脓感染中的应用[D];吉林大学;2008年

8 杨瑞梅;单链抗体介导狂犬病毒shRNA靶向制剂的研究[D];甘肃农业大学;2010年

9 付建芳;溶藻弧菌抗独特型抗体基因工程疫苗的研究[D];第四军医大学;2005年

10 余自强;抗血小板胶原受体糖蛋白VI单克隆抗体的制备和功能研究[D];苏州大学;2005年

相关硕士学位论文 前10条

1 江淼;抗活化血小板表面受体全套单链抗体噬菌体展示文库的构建和筛选[D];苏州大学;2003年

2 徐飞虎;抗肺癌单链抗体偶联绿色荧光蛋白基因的构建及表达研究[D];浙江大学;2003年

3 赵蕾;抗鸡传染性支气管炎病毒单链抗体原核表达质粒的构建及其间接ELISA筛选方法的建立[D];上海交通大学;2011年

4 张薇;抗T-2毒素单链抗体的制备及该毒素对细胞毒性影响的初步研究[D];福建农林大学;2010年

5 王溪桥;大容量人源肝癌核糖体展示单链抗体库的构建[D];兰州大学;2010年

6 纪秋野;抗蓖麻毒素单链抗体的构建、表达、纯化及功能测定[D];黑龙江八一农垦大学;2010年

7 张庆丽;抗EGFRvⅢ特异性单链抗体的构建及其靶向性研究[D];南华大学;2011年

8 刘晓雷;抗伏马菌素B_1单链抗体的制备[D];福建农林大学;2010年

9 于颖;PRRSV GP5蛋白抗独特型单链抗体的构建表达与鉴定[D];山东农业大学;2011年

10 刘海荣;丁香假单胞菌极毛蛋白HrpA的克隆表达与单链抗体的制备[D];福建农林大学;2011年

本文编号：2871041