犬骨髓EPCs的分离、鉴定和标记及组织工程化尿道的构建

发布时间：2017-04-05 15:09

  本文关键词：犬骨髓EPCs的分离、鉴定和标记及组织工程化尿道的构建，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)是促进工程化组织和器官血管再生的工具,并且在肿瘤病理学方面也可能成为限制肿瘤生长的作用靶点。目前关于EPCs的研究基本都是以大鼠或者兔作为模型动物,犬作为大型动物能够给人医临床提供很多参考,但是关于犬EPCs的研究却很少。因此本研究尝试用全骨髓培养法和差速贴壁法相结合的方式从犬骨髓中分离EPCs,并对其进行形态学观察、表面分子标记鉴定、体外功能分析。考虑到长段管状尿道缺损一直是泌尿系统临床的难题之一,我们尝试利用犬骨髓来源的EPCs和MSCs(bone marrow mesenchymal cells,BMSCs)作为种子细胞,人羊膜脱细胞基质(decellularized human amniotic scaffolds,dHAS)作为支架材料,构建犬组织工程化尿道,并对其进行组织学检测,为之后的预临床研究奠定基础。试验结果如下:1.摸索出了一种经济便捷的EPCs分离培养方法,即将全骨髓培养法和差速贴壁法相结合的方式。2.得到了两种不同类型的犬骨髓EPCs,即早期EPCs和晚期EPCs。3.对两种EPCs的形态学、表面分子标记和体外功能进行了分析比较。4.体外构建成功了犬组织工程化尿道。种子细胞在支架材料上分布均匀、增殖速度较快,并且贴合度很高。综上所述,本研究证明了全骨髓培养法和差速贴壁法相结合是一种便捷可靠的EPCs分离培养方法,并从犬骨髓中分离得到了纯度较高的早期EPCs和晚期EPCs,它们具有不同的生物学特性,在血管生成中的功能也不尽相同。以EPCs和BMSCs作为种子细胞,dHAS作为支架材料成功构建了犬组织工程化尿道,经过组织学观察和扫描电镜检测三者具有优良的相容性,为后续的体内评估奠定了良好的基础。
【关键词】：骨髓 内皮祖细胞 组织工程化尿道 犬
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R-33;Q813
【目录】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-9
• 第一章 内皮祖细胞的研究进展9-20
• 1.1 EPCs的发现9
• 1.2 EPCs的分离方法9-11
• 1.2.1 细胞培养法10
• 1.2.2 流式细胞仪筛选法10-11
• 1.3 EPCs的功能11
• 1.4 EPCs的动员和归巢11-14
• 1.4.1 体液因素对EPCs的动员和归巢的影响11-12
• 1.4.2 性激素对EPCs的动员和归巢的影响12-13
• 1.4.3 体能锻炼对EPCs的动员和归巢的影响13
• 1.4.4 药物治疗对EPCs的动员和归巢的影响13-14
• 1.5 机体循环EPCs数目的临床意义14-17
• 1.5.1 年龄对循环EPCs数目的影响15
• 1.5.2 心血管危险因子对循环EPCs数目的影响15-17
• 1.6 EPCs在缺血性疾病治疗方面的潜在应用17-18
• 1.7 展望18-20
• 第二章 组织工程化尿道的研究进展20-27
• 2.1 组织工程化尿道的应用背景20
• 2.2 种子细胞20-21
• 2.3 支架材料21-24
• 2.3.1 支架材料的分类22-23
• 2.3.2 支架材料的选择23-24
• 2.4 用脱细胞基质进行尿道重建24-25
• 2.5 用细胞-脱细胞基质复合物进行尿道重建25-26
• 2.6 展望26-27
• 第三章 犬骨髓EPCs的分离、鉴定和标记27-38
• 3.1 材料与方法27-31
• 3.1.1 材料27-29
• 3.1.2 细胞培养皿的包被29
• 3.1.3 EPCs的分离29
• 3.1.4 EPCs的传代培养29
• 3.1.5 EPCs的冻存29-30
• 3.1.6 EPCs的复苏30
• 3.1.7 MTT法绘制EPCs生长曲线30
• 3.1.8 EPCs表面分子标志鉴定30
• 3.1.9 吞噬Dil-ac-LDL和结合FITC-UEA-1 功能检测30
• 3.1.10 管腔形成试验30-31
• 3.1.11 EPCs的荧光标记31
• 3.2 结果31-36
• 3.2.1 形态学观察31-32
• 3.2.2 生长曲线的绘制32-33
• 3.2.3 表面分子标记鉴定33-34
• 3.2.4 Dil-ac-LDL摄取及FITC-UEA-1 结合能力检测34-35
• 3.2.5 管腔形成试验35
• 3.2.6 EGFP标记35-36
• 3.3 讨论36-38
• 3.3.1 EPCs来源的选择36
• 3.3.2 差速贴壁法36
• 3.3.3 EPCs的鉴定36-37
• 3.3.4 本研究存在的问题及努力方向37-38
• 第四章 犬组织工程化尿道的构建38-43
• 4.1 材料与方法38-40
• 4.1.1 材料38-39
• 4.1.2 组织工程化尿道的构建39-40
• 4.1.3 组织工程化尿道的检测40
• 4.2 结果40-41
• 4.2.1 组织工程化尿道的构建40
• 4.2.2 组织工程化尿道的检测40-41
• 4.3 讨论41-43
• 4.3.1 组织工程化尿道的应用前景41
• 4.3.2 dHAS的优势41-42
• 4.3.3 种子细胞的分化42
• 4.3.4 组织工程化尿道的血管化和组织相容性42
• 4.3.5 组织工程化尿道长度的选择42
• 4.3.6 本研究存在的问题及未来努力方向42-43
• 结论43-44
• 参考文献44-49
• 致谢49-50
• 作者简介50

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 温昱;张传森;;EPCs在心血管组织工程中的应用[J];解剖学杂志;2007年01期

2 于海莹,崔磊,曹谊林;内皮祖细胞(EPCs)研究进展[J];中国生物工程杂志;2003年08期

3 ;[J];;年期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 Alex F.Chen;;GTPCH I Overexpression Ameliorates Impaired EPCs Function in Type 1 Diabetes[A];中国药理学会第十次全国学术会议专刊[C];2009年

2 崔斌;黄岚;;eNOS基因修饰EPCs移植抑制损伤血管过度增殖改善血管内皮功能[A];第十三次全国心血管病学术会议论文集[C];2011年

3 ;Dynamic Changes and Significance of Circulating EPCs、VWF and TM in Patients with Traumatic Brain Injury[A];2011中华医学会神经外科学学术会议论文汇编[C];2011年

4 冉海涛;李巧;王志刚;钟世根;凌智瑜;李攀;李兴升;陈庆伟;;超声微泡联合Ad-EGFP/HIF-1α介导EPCs归巢大鼠缺血心肌的实验研究[A];第十届全国超声心动图学术会议论文[C];2010年

5 张晓芸;崔晓栋;官秀梅;李宏;成敏;;稳定细胞骨架对EPCs功能的影响[A];中国生理学会第九届全国青年生理学工作者学术会议论文摘要[C];2011年

6 李巧;李兴升;王志刚;冉海涛;钟世根;凌智瑜;李攀;陈庆伟;;超声微泡联合Ad-EGFP/HIF-1α介导EPCs移植治疗大鼠心肌梗死的研究[A];第十届全国超声心动图学术会议论文[C];2010年

7 何智辉;;5-杂氮-2‘-脱氧胞苷对CSES所致EPCs功能及其Sca-1表达的影响[A];中华医学会呼吸病学年会——2013第十四次全国呼吸病学学术会议论文汇编[C];2013年

8 杨瑞瑞;杜怡峰;郭守刚;;VEGF动员内源性EPCs促进MCAO/R小鼠神经功能修复[A];山东省2013年神经内科学学术会议暨中国神经免疫大会2013论文汇编[C];2013年

9 霍亚南;黎金凤;;SDF-1对糖尿病患者外周血EPCs功能影响的研究[A];江西省中西医结合学会内分泌专业委员会第二次学术会议、内分泌与代谢性疾病中西医结合诊治新进展学习班资料汇编[C];2013年

10 崔晓栋;张晓芸;李宏;官秀梅;李鑫;成敏;;流体剪切应力对EPCs生物学特性的影响[A];第十届全国生物力学学术会议暨第十二届全国生物流变学学术会议论文摘要汇编[C];2012年

中国重要报纸全文数据库 前1条

1 民泾;EPCs捕获技术改善支架生物相容性[N];医药经济报;2003年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 Shah Ourban Ali;家禽EPCs分离培养及HGF对炎症环境下EPCs功能的影响[D];浙江大学;2015年

2 叶家欣;强化他汀治疗促进EPCs动员改善心肌缺血的临床和基础研究[D];南京医科大学;2012年

3 陈飞兰;内皮祖细胞（EPCs）在胶质瘤微血管构筑表型异质性形成中的作用及其机制研究[D];第三军医大学;2008年

4 杨兆华;内皮祖细胞（EPCs）对移植性动脉硬化的作用及其机制研究[D];复旦大学;2009年

5 王航;过表达PDGFR-β的EPCs在损伤血管修复中作用研究[D];第三军医大学;2012年

6 崔斌;eNOS基因修饰EPCs移植与损伤内膜修复的实验研究[D];第三军医大学;2008年

7 谭虎;vWF A3-GPI强化EPCs富集及其在损伤血管壁修复中作用的实验研究[D];第三军医大学;2008年

8 况春燕;STIM1/TRPC1复合体对EPCs修复损伤血管能力的影响[D];第三军医大学;2011年

9 喻杨;血管损伤修复中CCNI对EPCs功能的影响及其机制研究[D];第三军医大学;2009年

10 李巧;超声微泡联合Ad-EGFP/HIF-1α介导EPCs移植治疗大鼠心肌梗死的实验研究[D];重庆医科大学;2010年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 孙丽娜;Visfatin对内皮祖细胞凋亡的影响及其机制探讨[D];河北医科大学;2015年

2 薛国能;用于捕获和归巢EPCs的Fucoidan与CD133抗体/SDF-1复合生物涂层的构建[D];西南交通大学;2015年

3 张硕;骨髓源性EPCs对脊髓源性NSCs增殖分化的影响[D];安徽医科大学;2015年

4 王芳娟;Klotho蛋白改善人EPCs功能、修复血管损伤的研究[D];第三军医大学;2015年

5 高玉元;丝蛋白涂层弹簧圈可控释放SDF-1α及其诱导EPCs参与大鼠动脉瘤修复的实验研究[D];南方医科大学;2015年

6 买超平;中低海拔因素下冠心病患者EPCs数量及其与相关因子关系的实验性研究[D];兰州大学;2015年

7 王健;针药并用对气虚血瘀证MCAO模型大鼠海马VEGF表达及外周血EPCs数目的影响[D];天津医科大学;2015年

8 黄佳雯;ZFP580调控eNOS/NO信号通路促进EPCs分化的分子机制研究[D];天津医科大学;2015年

9 南伟;不同来源的EPCs对NSCs增殖分化的影响[D];兰州大学;2016年

10 郑淑欣;负载骨髓MSCs和/或EPCs的羊膜支架修复犬长段尿道缺损的研究[D];西北农林科技大学;2016年

  本文关键词：犬骨髓EPCs的分离、鉴定和标记及组织工程化尿道的构建，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：287206