产PER-1型ESBLs革兰阴性杆菌的研究

发布时间：2020-11-06 13:39

　　 研究背景 β－内酰胺类药物是治疗革兰阴性杆菌感染的最主要药物，革兰阴性杆菌对β－内酰胺类抗生素耐药的主要原因是产生了分解β－内酰胺环的β－内酰胺酶 。超广谱β－内酰胺酶（Extended-spectrum β-lactamases ESBLs）主要由TEM-1 、TEM-2和SHV-1型广谱β－内酰胺酶经几个氨基酸点突变而来，能水解包括第三代头孢菌素在内的β－内酰胺类药物，不水解头霉类、碳青霉烯类抗生素，其活性可被克拉维酸、舒巴坦、他唑巴坦等酶抑制剂抑制。最近30年来，由于第三代头孢菌素的大量使用，产 ESBLs的革兰阴性杆菌越来越多。到目前为止，检出的ESBLs有100余种。除了TEM型和SHV型ESBLs外，还有CTX-M型、PER型 、VEB 型等ESBLs。ESBLs主要由肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌产生，但近年来在其他肠杆菌科细菌以及非发酵菌中的ESBLs检出率也有增长趋势，产ESBLs革兰阴性杆菌呈多重耐药性。PER－1型ESBLs是非TEM型和非SHV型ESBLs，最早在铜绿假单胞菌中检出，且主要在欧洲的地中海国家。近年来在沙门菌属、不动杆菌属、奇异变形杆菌、肺炎克雷伯菌等细菌中也检出PER－1型ESBLs。在韩国和我国也有报道，但PER－1型ESBLs在肠杆菌科的流行情况还不清楚，非常有必要对产PER-1型ESBLs肠杆菌科细菌进行研究。目的　研究南昌地区大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌产ESBLs情况及耐药谱；检测三种细菌产PER－1型ESBLs的情况以及产PER－1型ESBLs菌株的耐药特点；调查是否有产PER－1型ESBLs菌株引起的院内感染发生。方法　收集2002年8月至2003年6月间从南昌地区四家医院分离的167株大肠埃希菌、154株肺炎克雷伯菌和67株阴沟肠杆菌，用头孢噻肟（Cefotaxime CTX ）或头孢他啶（Ceftaxidime CAZ）药敏纸片筛选产ESBLs可疑株；用头孢噻肟（Cefotaxime CTX）和头孢噻肟加克拉维酸（Cefotaxime /Clavulanic Acid CTX/CA）或头孢他啶（Ceftaxidime CAZ）和头孢他啶加克拉维酸（Ceftaxidime/ Clavulanic Acid CAZ/CA ）双纸片扩散法检测ESBLs，；采用 K－B法进行药敏试验、PCR扩增PER-1基因，对PER-1基因扩增阳性的菌株用改良三相试验进行ESBLs的确证，对PER-1 WP=4 基因扩增阳性的PCR原液进行DNA测序；用肠杆菌科菌属间的重复序列(entrobacter repetitive intergenic concescus ERIC)作为引物扩增PER-1基因阳性的菌株进行基因分型。结果 符合 CTX筛选标准的有158株，符合CAZ筛选标准的有94株，两者都符合的有76株，共176株产ESBLs可疑株。CTX 和CTX/CA双纸片检出115株阳性，CAZ和 CAZ/CA双纸片检出62株阳性，两种双纸片法都为阳性的有51株，共检出126株产ESBLs菌株。大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌的ESBLs检出率分别为30%（50/167）、34%（52/156）和36%（24/67）。产ESBLs株对氨苄西林、阿齐霉素和克林霉素的耐药率近乎100%, 对阿米卡星、环丙沙星和呋喃妥因的耐药相对较低，除2株产ESBLs肺克雷伯菌耐亚胺培南外，其余均为敏感。PER-1基因扩增阳性共16株，其中大肠埃希菌6株、肺炎克雷伯菌5株、阴沟肠杆菌5株，PER-1基因阳性率分别为 3.6%(6/16７)、3.2%(5/156)和9.0%(5/67)，经测序PCR产物片段为579bp，与PAPER-1的594-1172bp之间的579bp符合率为100%。16株PER-1阳性的菌株改良三相试验结果为14株单产ESBLs，2株为同时产ESBLs和AmpC酶，一株为肺炎克雷伯菌，另一株为阴沟肠杆菌。PER-1基因阳性株对头孢他啶、头孢噻肟耐药率为100%，头孢西丁耐药率也达94%，对阿米卡星和头孢吡肟的耐药率较低，分别为56%和31%，对亚胺培南的耐药率为0。ERIC2引物扩增6株产PER-1型ESBLs大肠埃希菌结果为5个基因型，两株菌的DNA条带完全相同且表型耐药谱也相似，而5株阴沟肠杆菌有５个基因型。结论　　南昌地区大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌的产ESBLs率较高，耐药性严重。筛选产ESBLs可疑株的最佳纸片为 CTX，表型确证产ESBLs菌株的最佳双纸片为CTX和 CTX/CA。阴沟肠杆菌的产ESBLs率超过肺炎克伯菌成为主要产ESBLs菌。PER-1基因已在肠杆菌科细菌中播散，阴沟肠杆菌为首次检出PER-1基因。治疗产PER-1型ESBLs菌株引起的感染可选用亚胺培南或阿米卡星。改良三维试验可用于检测同时产ESBLs和AmpC酶的菌株。ERIC-PCR是简便的、可用于多重耐药菌株流行病学调查的方法。未发现产PER-1型ESBLs菌株造成的院内感染。
【学位单位】：江西医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2004
【中图分类】：R378
【文章目录】：
一、 中文摘要
二、 英文摘要
三、 前言
四、 材料与方法
五、 结果
六、 讨论
七、 结论
八、 参考文献
九、 致谢
十、 附录

【参考文献】

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本文编号：2873206