人促甲状腺激素受体真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达

发布时间：2020-11-15 05:04

　　 目的：构建pcDNA3.1(+)人促甲状腺激素受体（hTSHR）基因真核表达载体，并在COS-7细胞中进行表达，为进一步研究hTSHR的生物学功能，以及利用hTSHR真核表达载体建立Graves病的实验动物模型奠定基础。 方法：以限制性内切酶EcoR I和Xba I双酶切质粒pBluescript SK(-)/hTSHR，获得hTSHR cDNA的全长片段，在以低熔点琼脂糖回收纯化后，定向插入真核表达载体pcDNA3.1(+)的多克隆酶切位点中，构建重组体pcDNA3.1/hTSHR，进行酶切、PCR及DNA测序鉴定。采用脂质体转染法，以重组质粒pcDNA3.1/hTSHR 转染COS-7细胞进行瞬时表达，并用RT-PCR和免疫细胞化学染色法检测被转染细胞hTSHR的表达情况。 结果：双酶切pBluescript SK(-)/hTSHR得到一约2.7 kb含有 TSHR全长cDNA的片段，同预期片段的大小相符。所构建的pcDNA3.1/hTSHR经双酶切及PCR鉴定同预期大小相符，测序结果与GenBank中收录的hTSHR cDNA全长序列一致，表明hTSHR真核表达质粒构建正确。以脂质体转染COS-7细胞后，RT-PCR和免疫细胞化学染色法检测表明，细胞可以表达hTSHR并具有抗原性。 结论：成功地构建了真核重组表达质粒pcDNA3.1/hTSHR，hTSHR WP=8 体外表达体系的建立，有利于下一步利用hTSHR真核表达载体建立Graves病动物模型，为进一步研究Graves病的发病机理及治疗打下一定基础。
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2004
【中图分类】：R346
【文章目录】：
符号说明
中文摘要
英文摘要
前 言
第一部分 人促甲状腺激素受体（hTSHR）真核表达载体的构建及鉴定
    材料与方法
    实验结果
    讨论
第二部分 人促甲状腺激素受体表达载体在COS-7细胞中的表达
    材料与方法
    实验结果
    讨论
全文小结
附 图
参考文献
文献综述
致 谢
研究生期间发表和待发表的论文

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本文编号：2884374