家蚕高血蛋白疾病模型的建立及其对丝腺退化发育的影响

发布时间：2017-04-09 16:20

  本文关键词：家蚕高血蛋白疾病模型的建立及其对丝腺退化发育的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：循环血液中的蛋白质(氨基酸)水平异常是常见的代谢疾病,包括高蛋白血症和低蛋白血症。其中因为氨基酸代谢障碍引起的遗传性氨基酸水平升高疾病已发现超过100种,然而还缺乏纯粹意义的高蛋白血症疾病相关病理和治疗的报道。其主要原因是目前还无有效的高蛋白血症动物模型,也缺乏高蛋白血症动物模型建模方法的报道。为此,本文对无脊椎模式动物家蚕开展了相关研究。丝腺是家蚕最具特色的器官,在家蚕幼虫化蛹变态过程中发生典型的程序性死亡。对丝腺退化发育的研究一直受到广泛地重视。本文在基础形态和指标测定的基础上,应用BCA方法测定家蚕血淋巴中的总蛋白,高效液相色谱法测定21种氨基酸相对含量。进一步应用PT-PCR、q RT-PCR方法调查了凋亡自噬基因在高血蛋白模型家蚕丝腺中的表达差异,免疫荧光检测凋亡蛋白Caspase-3表达情况。从细胞程序性死亡机制视角初步研究了高血蛋白对于丝腺退化异常的影响。主要结果如下:1家蚕高血蛋白疾病模型的建立本文使用的家蚕高血蛋白疾病模型的建模方法与原理是,在家蚕幼虫成熟并停止进食后,破坏或堵塞其头部前段的吐丝孔,阻止丝腺中储存蛋白质外分泌。破坏或堵塞成熟幼虫吐丝孔的方法有高温或低温激光、高温烫伤、以及低熔点石蜡或无毒胶水封涂等,本文报道了低熔点石蜡封涂方法的建模结果。BCA方法测定该高血蛋白模型,9d 11d化蛹期间循环血总蛋白水平高于对照150-600%。高效液相色谱法测定的蛹期9d 11d期间循环血中总氨基酸水平高于对照130-200%,其中Ser,Gln,Thr,Arg,Val,Trp,Phe和Lys等8种氨基酸含量升高显著,组氨酸(His)含量显著降低。丙氨酸、丝氨酸和酪氨酸等几种丝蛋白质高含量的氨基酸疾病模型中合理地高于对照,而丝蛋白中含量33%的甘氨酸,在疾病模型家蚕的循环血与对照中没有显著差异。2家蚕高血蛋白疾病模型的丝腺组织退化以丝腺组织为靶组织研究的结果显示,家蚕高血蛋白疾病模型的丝腺退化过程相对于对照组延长了约120h。HE染色观察程序性细胞希望的典型特点。细胞自噬和凋亡信号通路相关基因表达水平检测结果显示,高血蛋白疾病模型家蚕的丝腺细胞中自噬信号基因Atg6和Atg8在家蚕化蛹期间表达上升显著慢于对照组家蚕。而高血蛋白疾病模型家蚕中凋亡相关信号基因Dronc在化蛹期间的表达情况与对照组没有显著差异。免疫组化实验结果显示,对照家蚕和高血蛋白疾病模型家蚕中启动细胞凋亡的关键蛋白Caspase-3在丝腺整个退化过程中都表达。表明高血蛋白疾病模型家蚕丝腺退化延缓可能主要与自噬作用启动延迟有关。
【关键词】：家蚕 高血蛋白 氨基酸 疾病模型 丝腺 程序性细胞死亡
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R589.3;R-332
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 第一章 序言10-21
• 1 血液蛋白质（氨基酸）代谢疾病及其疾病模型10-12
• 2 家蚕疾病动物模型12-13
• 3 家蚕丝腺的生物学特点及退化发育研究现状13-18
• 4 本文研究内容18-20
• 5 研究技术路线20-21
• 第二章 高血蛋白家蚕疾病模型的建立21-43
• 1 引言21-22
• 2 实验材料与方法22-29
• 2.1 实验动物22
• 2.2 常用材料与试剂22-25
• 2.3 建模动物处理25-26
• 2.4 家蚕茧层率统计26-27
• 2.5 家蚕变态期死亡率和化蛹状态统计27
• 2.6 家蚕血淋巴中总蛋白含量检测27
• 2.7 家蚕血淋巴中氨基酸含量检测27-29
• 3 实验结果与分析29-43
• 3.1 构建高蛋白血症家蚕疾病模型的幼虫处理方法29
• 3.2 高蛋白血症家蚕疾病模型的蚕品种选择29-30
• 3.3 家蚕吐丝时间与吐丝量的关系30-31
• 3.4 阻止吐丝时间与家蚕死亡率的关系31-32
• 3.5 阻止吐丝时间对家蚕化蛹变态的影响32-34
• 3.6 高血蛋白模型家蚕血淋巴中总蛋白含量34-36
• 3.7 高血蛋白模型家蚕血淋巴中氨基酸含量36-43
• 第三章 高血蛋白家蚕的丝腺退化发育模式43-55
• 1 引言43-44
• 2 材料与方法44-47
• 2.1 实验动物44
• 2.2 丝腺的解剖及HE染色切片制作与观察44
• 2.3 家蚕细胞程序性死亡基因Dronc，Atg6，Atg8 表达情况检测44-46
• 2.4 家蚕丝腺中Caspase-3 蛋白的免疫荧光检测46-47
• 3 实验结果与分析47-55
• 3.1 家蚕高血蛋白疾病模型丝腺器官形态变化47-48
• 3.2 家蚕高血蛋白疾病模型丝腺组织切片观察48-50
• 3.3 家蚕高血蛋白模型丝腺中细胞程序性死亡信号基因表达水平变化50-53
• 3.4 家蚕高血蛋白模型丝腺中Caspase-3 蛋白表达情况53-55
• 第四章 结论与讨论55-58
• 1 高血蛋白家蚕疾病模型的构建55-56
• 2 高血蛋白家蚕疾病模型的游离氨基酸特点56
• 3 高血蛋白家蚕疾病模型随丝腺退化发育的影响56-57
• 4 论文创新点57
• 5 后续研究展望与建议57-58
• 参考文献58-67
• 发表论文与申请专利67-68
• 致谢68-69

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

1 宋光晔;王叶元;钟杨生;陈芳艳;林健荣;;饥饿对蚁蚕体内氨基酸含量的影响[J];广东蚕业;2012年04期

2 顾向应;血高半胱氨基酸过多症:妇女不明原因反复早期流产的一个危险因素[J];国外医学(计划生育分册);1994年04期

3 刘影;刘韩菡;李胜;;果蝇变态过程中的细胞凋亡和细胞自噬[J];昆虫知识;2009年05期

4 蒋立锐;组氨酸在代谢中的作用[J];生理科学进展;1985年02期

5 孔令媛;刘莉;梅其炳;;低蛋白血症大鼠模型的建立[J];西北国防医学杂志;2006年04期

6 范志娟;刘树业;;肝癌病人血浆氨基酸变化与肝功能的相关性分析[J];中国实验诊断学;2011年02期

7 尤征英;危浩;阮系真;叶露鹏;王少华;周继勇;钟伯雄;;家蚕丝腺生物反应器表达狂犬病病毒核蛋白[J];中国农业科学;2013年18期

8 吴，

本文编号：295657