源于原始生殖细胞的人、小鼠ES细胞的分离克隆

发布时间：2021-01-04 12:07

　　摘 要 本研究探讨不同的饲养层、胎龄、细胞因子及添加物对小鼠胚胎源ES细胞和PGCs源人、小鼠胚胎干细胞分离克隆的影响，得到早期传代的人、小鼠类ES细胞。 1．MEF、bEF、hEF三种饲养层细胞对小鼠胚胎（囊胚）贴壁率和ICM扩增率分别为91.5%a、76.2%b、64.2%c；74.8%a;、69.8%b’、38.47%c’，各组间差异显著（除a’∶b’，P>0.05，其余P<0.05）。同源MEF饲养层细胞最有利于小鼠胚胎源ES细胞的分离培养。2．自9.5-13.5dpc小鼠胎儿PGCs可以获得早期传代类ES的胞系。7.5-8.5及14.5-15.5dpc小鼠胎儿原代培养观察到类ES细胞集落，16.5-18.5dpc小鼠胎儿原代培养未观察到类ES细胞。3．总共收集分离流产儿136例，其中110例4-13W胎儿中56例观察到类ES细胞集落。39例做传代培养，H58传至9代，7例传至5代以上。4．自4-13W流产儿PGCs均可分离到人类ES细胞。5-10W流产儿最适于PGCs源的人类ES细胞的分离克隆，5W以下或大于17W流产儿难于得到PGCs源的人类E... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
文献综述
1 前言
2 哺乳动物ES细胞研究历史
3 早期胚胎源的哺乳动物ES细胞的研究进展
    3.1 小鼠ES细胞
    3.2 猪ES细胞
    3.3 牛ES细胞
    3.4 羊ES细胞
    3.5 兔ES细胞
    3.6 水貂ES细胞
    3.7 仓鼠ES细胞
    3.8 灵长类动物和人类ES细胞
4 PGCs源的哺乳动物ES细胞研究进展
    4.1 自PGCS分离克隆ES细胞系的优势
    4.2 自PGCS分离克隆各种哺乳动物ES细胞的研究进展
        4.2.1 小鼠
        4.2.2 大鼠
        4.2.3 兔
        4.2.4 猪
        4.2.5 羊
        4.2.6 牛
        4.2.7 人
    4.3 关于自PGCS分离克隆哺乳动物ES细胞几个问题的探讨
        4.3.1 PGCS能转化成ES细胞
        4.3.2 EG细胞不有完全替代ES细胞
5 ES细胞建系
    5.1 ES细胞材料的获取
        5.1.1 早期胚胎的获取处理
        5.1.2 PGCS的分离
    5.2 ES细胞的分化抑制培养
        5.2.1 基础培养基和一般添加物
        5.2.2 分化抑制物
        5.2.3 生长因子
        5.2.4 抗凋亡剂
    5.3 ES细胞的克隆
    5.4 ES细胞的冷冻与解冻
    5.5 ES细胞的鉴定
        5.5.1 ES细胞的形态特征和生长特性
        5.5.2 ES细胞的核型
        5.5.3 ES细胞冷冻、解冻
        5.5.4 ES细胞表达的酶，细胞表面抗原和受体
        5.5.5 ES细胞的端粒酶活性
        5.5.6 ES细胞的高度分化潜能
6 影响ES细胞分离克隆的因素
7 ES细胞的应用前景与展望
    7.1 生产克隆动物的高效材料
    7.2 ES细胞是生产转基因动物的高效载体
    7.3 发育生物学研究的理想体外模型系统
    7.4 高效新型药物的发现、筛选及动物和人类疾病的模型
    7.5 细胞、组织和器官的修复与移植治疗和基因治疗的高效载体细胞
8 小结
实验研究
    1 引言
    2 材料与施
        2.1 验材料
            2.1.1 实验动物
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 主要溶液配制
            2.2.2 胎儿成纤维细胞的分离培养(小鼠、人流产儿
            2.2.3 小鼠、人胎儿成纤维细胞的继代培养
            2.2.4 小鼠、人、牛胎儿成纤维细胞饲养层的制备
            2.2.5 小鼠、人原始生殖细胞（PGCs）的获取
            2.2.6 ES细胞继代培养
            2.2.7 ES细胞的鉴定
    3 结果
        3.1 成纤维细胞的生长行为
        3.2 小鼠PGCs源ES细胞生长行为
            3.2.1 共培养法PGCs源小鼠ES细胞生长行为
            3.2.2 小鼠PGCs传代后生长行为
            3.2.3 胎龄对自PGCS分离克隆小鼠ES细胞的影响
        3.3 人PGCs的体外培养
        3.4 自流产儿PGCs分离克隆ES细胞的效果
        3.5 培养液对自PGCs分离克隆人ES细胞的影响
            3.5.1 培养液中添加物对自PGCs分离克隆人类ES细胞的影响
        3.6 饲养层对ES细胞分离克隆的影响
        3.7 ES细胞的鉴定
    4 讨论
        4.1 PGCs获取对人、小鼠ES细胞分离克隆的影响
        4.2 胎龄对人、小鼠ES细胞分离克隆的影响
        4.3 细胞因子对人类ES细胞分离克隆的影响
        4.4 饲养层对人类ES细胞分离克隆的影响
        4.5 人、小鼠ES细胞的鉴定
    5 结论
参考文献
作者简介
附图说明


【参考文献】：
期刊论文
[1]自PGCs分离克隆哺乳动物ES细胞的研究进展[J]. 华进联,窦忠英,李松.  农业生物技术学报. 2001(01)
[2]胚胎干细胞的研究与应用[J]. 窦忠英,华进联.  动物医学进展. 2001(01)
[3]自原始生殖细胞分离克隆小鼠ES细胞研究初报[J]. 华进联,窦忠英,李松,雷安民,杨春荣.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2001(01)
[4]从原始生殖细胞分离克隆牛胚胎干细胞的研究[J]. 李松,窦忠英,华进联,屈雷,杨春荣.  农业生物技术学报. 2000(04)
[5]原始生殖细胞和胚胎生殖细胞发育多能性[J]. 许新,丛笑倩,严缘昌.  生殖与避孕. 2000(05)
[6]兔和小鼠早期胚胎ICM在ES培养系统中行为的比较[J]. 郑瑞珍,辛俭,朱少侠,宋红立.  动物学报. 2000(03)
[7]用大鼠心肌条件培养基建立来源于C57BL/6J小鼠的ES细胞系[J]. 童英,邹冀中,尚克刚.  北京大学学报(自然科学版). 2000(04)
[8]人胚胎干细胞的研究[J]. 胡显文,陈昭烈,黄培堂.  生物技术通讯. 2000(02)
[9]胚胎干细胞体外分化为心肌细胞诱导因素的探讨[J]. 刘兰英,杨琨,朱振宇,刘玉川,余细勇,银巍,汤建,马涧泉,顾军.  中国病理生理杂志. 2000(05)
[10]体外定向诱导胚胎干细胞为造血细胞[J]. 徐令,乔春平,黄绍良,李树浓,吴旋.  科学通报. 2000(08)

博士论文
[1]成年体细胞克隆山羊研究[D]. 郭继彤.西北农林科技大学 2000
[2]牛胚胎干细胞的分离与克隆[D]. 安立龙.西北农业大学 1999



本文编号：2956737