幽门螺杆菌国内流行株动物模型的建立

发布时间：2017-04-11 10:04

  本文关键词：幽门螺杆菌国内流行株动物模型的建立，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景：目前研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)在胃炎、胃溃疡及胃癌等疾病中的致病机制的主要方式是建立动物感染Hp的模型,模拟Hp在人体内的致病机制。现在国外Hp感染动物模型建立的技术相对成熟。人们成功的从不同动物及人胃中分离出多种螺杆菌,比如猫胃中分离出猫螺旋杆菌(Helicobacter felis,Hf)等。1997年Lee等人从临床分离出幽门螺杆菌悉尼株(Helicobacter pylori Sydney strain 1 SS1),此菌株能长期有效的定植在实验动物胃中,并成功的在实验动物胃中产生慢性炎症,萎缩性胃炎,肠上皮化生及不典型增生等病理变化。现在SS1菌株作为国际标准株,被广泛的应用到动物建模中。用来建立Hp感染模型的动物种类有很多,如沙鼠、小鼠、大鼠、豚鼠、猫、无菌猪、恒河猴等,其中一些动物因价格昂贵、饲养条件高等原因限制其在试验中的广泛应用,目前蒙古沙鼠和小鼠较为常用。其中,蒙古沙鼠的Hp感染模型能较好复制Hp在人类的胃中的行为模式,但是蒙古沙鼠也有价格相对较高,饲养方法较复杂,能产生的抗体及引物有限,缺乏基因转换的特异性等缺陷。最易建立并且容易饲养的啮齿类动物模型为小鼠,尤其是C57BL/6及FVB小鼠,能够感染猫螺杆菌及不同种类的Hp,并表现为强烈的辅助性T细胞1(Helper T cell 1,Th1)应答反应,而BALB/c小鼠虽然负荷菌量和C57BL/6差不多,但是其感染后主要产生辅助性T细胞2(Helper T cell 2,Th2)细胞因子,对上皮的损伤较小。现阶段,SS1感染的C57BL/6小鼠已经成为标准模型。在国内,Hp感染相关的动物模型的建立仍处于初级阶段,建模成功率较低,动物模型多为SS1菌株感染C57BL/6小鼠或者BALB/c小鼠,还有部分蒙古沙鼠等。因为不同的菌株对于不同的宿主也会有不同的致病性,我国致病性较强的菌株为vac AS1、cagA、iceA1阳性的Hp菌株,若能建立一个我国流行菌株的标准动物模型,对于我国Hp相关消化道疾病的研究能够建立一个更好的研究平台。目的：本课题通过文献阅读确立空泡细胞毒素AS1 (vacAS1)、细胞毒素相关基因A (cagA)、表皮接触诱导基因A1 (iceAl)阳性的临床分离株为目前国内流行株。对6株临床HP菌株进行基因检测,选择vacAS1、cagA、iceAl阳性的菌株作为致病菌。选用无特殊病原体(Specifc pathogen free,SPF)的C57BL/6小鼠为研究对象,来建立国内幽门螺杆菌流行株的动物模型,研究vacAS1、cagA、 iceAl阳性的幽门螺杆菌流行株感染导致的小鼠胃粘膜改变,为进一步研究致病机制、药物治疗、疫苗研究提供更好的动物模型和研究平台。方法：先对临床分离的六株幽门螺杆菌行基因组检查,确认vacAS1、cagA、iceA1阳性的致病株,并进行培养扩增。取60只SPF级C57BL/6小鼠,随机分为对照组,模型组,每组30只。对照组正常饲养,模型组经口灌服vacAS1、cagA、iceAl阳性的Hp临床分离株,每周一次,连续灌服5周,距末次灌胃后5w,10,15w,20w,25w,30w分6批处死小鼠,每批次5只。取标本行快速尿素酶试验,Giemsa染色法观察幽门螺杆菌在胃黏膜上的定植情况,HE染色观察小鼠胃黏膜的病理变化。结果：对照组小鼠的胃窦、胃体及十二指肠粘膜的尿素酶试验,Giemsa染色结果均阴性,模型组在距末次灌胃后5w, 10w,15w,20w,25w,30w幽门螺杆菌定植率分60%、80%、100%、100%、100%、100%。至20w时模型组开始出现萎缩性炎症改变,至30w结束时模型组慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠化、异型增生、胃癌的发生率分别为100%、60%、0%、0%、0%。结论：本实验成功建立了幽门螺杆菌vacAS1、cagA、iceA1阳性的国内流行株感染C57BL/6小鼠的模型,并明确了其感染小鼠后各阶段的胃黏膜病理改变。
【关键词】：幽门螺杆菌 中国流行株 动物模型
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R573;R-332
【目录】：

• 致谢4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 引言12-15
• 材料和方法15-24
• 结果24-26
• 讨论26-29
• 结论29-30
• 参考文献30-34
• 综述34-42
• 参考文献39-42
• 作者简历42

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 侯鹏,许国铭,龚燕芳,屠振兴,李兆申,纪徐淮;上海人幽门螺杆菌vac A基因表型与相关胃肠疾病[J];中华内科杂志;1999年11期

  本文关键词：幽门螺杆菌国内流行株动物模型的建立，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：298839