重组人垂体腺苷酸环化酶激活多肽及其衍生多肽的研制、生物功能筛选及鉴定

发布时间：2021-03-24 15:10

　　垂体腺苷酸环化酶激活肽（pituitary adenylate cyclase activating polypeptide，PACAP）是具有重要生物学功能和极具应用价值的神经多肽。为利用基因工程技术获得非融合的重组人垂体腺苷酸环化酶激活肽（recombinant human PACAP，rhPACAP），采用rhPACAP与纤维素结合域（cellulose binding domain，CBD）融合表达，并在两者之间引入Xa因子的识别位点（Ile-Glu-Gly-Arg↓）。融合蛋白CBD-PACAP经纤维素亲和层析纯化后，Xa因子酶切释放非融合重组PACAP。HPLC进一步纯化的重组PACAP多肽经Western blot与激光飞行质谱鉴定。制备的rhPACAP具有促进胰腺癌细胞株SW1990胞内cAMP合成的活性，表明其具有生物学活性。在两个融合蛋白（CBD-PACAP和CBD-IGF）中Xa因子识别位点（Ile-Glu-Gly-Arg↓）前引入7个氨基酸组成的富含甘氨酸柔性短肽（Gly-Thr-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly），经比较Xa因子对引入短肽前、后融合蛋白的... 

【文章来源】：暨南大学广东省 211工程院校

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

重组质粒的酶切分析

图4CBD一狱C^P(A)和CB卜玖C^P(B)融合蛋白的表达、纯化和W七sternbolt鉴定Fig.4ExPressio氏PurincationandWesternboltofCB压PACAP(A)andCB卜PACAP(B)fusionProteinsa:ExPressionandPurineationofCBD一PACAP(A):1.Unindueedbacteria;2.SuPernantofultrasonieatedbacteria;3.DePositofultrasonieatedbaeteria;4.Indueedbacteria;5·PurifiedProtein;M.Proteinmarker;b:W七sternboltofCB卜PACAP(A):1.Unindueedbaeteria;2.Indueedbaeteria;e:ExPressionandPurineationofCBD-PACAP(B):1·Unindueedbaeteria;M.Proteinmarke暇2.Indueedbaeteria;3.SuPernaotofultrasonicat.dbacteria;4·PurinedProtein;d:Westernb0ltofCBD-PACAP(B):1.Uninducedbacteria;2·IndUCedbaCteria采用相同的方法表达和纯化CBD一IoF(A)和CBD一IGF(B)蛋白(图5)。kD97.4一66)一

2al-琳图4CBD一狱C^P(A)和CB卜玖C^P(B)融合蛋白的表达、纯化和W七sternbolt鉴定Fig.4ExPressio氏PurincationandWesternboltofCB压PACAP(A)andCB卜PACAP(B)fusionProteinsa:ExPressionandPurineationofCBD一PACAP(A):1.Unindueedbacteria;2.SuPernantofultrasonieatedbacteria;3.DePositofultrasonieatedbaeteria;4.Indueedbacteria;5·PurifiedProtein;M.Proteinmarker;b:W七sternboltofCB卜PACAP(A):1.Unindueedbaeteria;2.Indueedbaeteria;e:ExPressionandPurineationofCBD-PACAP(B):1·Unindueedbaeteria;M.Proteinmarke暇2.Indueedbaeteria;3.SuPernaotofultrasonicat.dbacteria;4·PurinedProtein;d:Westernb0ltofCBD-PACAP(B):1.Uninducedbacteria;2·IndUCedbaCteria采用相同的方法表达和纯化CBD一IoF(A)和CBD一IGF(B)蛋白(图5)。kD

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3097940