Toll样受体4通过Akt/FoxO3a/Bim信号通路参与海马神经元凋亡

发布时间：2021-05-01 05:02

　　为了探讨海马神经元中是否有Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）介导的Akt/FoxO3a/Bim信号通路,及该通路在海马神经元凋亡中的作用和机制,本实验运用脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）作用于原代培养的大鼠海马神经元,利用不同的工具药,以减弱或加强TLR4/Akt/FoxO3a/Bim通路的作用。应用CCK-8法检测细胞活力,Western blot法检测神经元p-Akt（Ser473）、Akt、p-FoxO3a（Thr32）、FoxO3a、Bim、活化的Caspase-3蛋白的表达变化,real-time PCR法检测海马神经元Bim的mRNA表达变化,免疫荧光法观察FoxO3a核易位情况,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果显示:LPS作用于海马神经元不同时间后,各组细胞活力均下降（P<0.05）,且具有一定的时间依赖性;LPS作用后p-Akt（Ser473）、p-FoxO3a（Thr32）表达减少,FoxO3a易位进入胞核,而促凋亡蛋白Bim及活化的Caspase-3表达增加,且海马神经元的凋亡率也增加（P<0.05... 

【文章来源】：生理学报. 2014,66(03)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 动物
        1.1.2 试剂与仪器
    1.2 方法
        1.2.1 海马神经元的原代培养及纯度鉴定
        1.2.2 CCK8法检测LPS对海马神经元活力的影响
        1.2.3 Western blot法测定海马神经元p-Akt(Ser473)、Akt、p-Fox O3a(Thr32)、Fox O3a、Bim、活化的Caspase-3蛋白的表达
        1.2.4 Real-time PCR法测定海马神经元Bim m RNA的表达
        1.2.5 细胞免疫荧光法观察Fox O3a核易位
        1.2.6 Annexin V-PI双染、流式细胞术检测海马神经元的凋亡率
        1.2.7 数据处理与统计分析
2 结果
    2.1 海马神经元的原代培养与纯度鉴定
    2.2 LPS对海马神经元活力的影响
    2.3 海马神经元p-Akt(Ser473)、p-Fox O3a(Thr32)、Bim以及活化的Caspase-3蛋白的表达
    2.4 海马神经元Bim的m RNA的表达变化
    2.5 Fox O3a核易位变化
    2.6 海马神经元的凋亡率
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]Toll-like receptor 4-mediated signaling participates in apoptosis of hippocampal neurons[J]. Yue He,Ailing Zhou,Wei Jiang.  Neural Regeneration Research. 2013(29)
[2]Role of Toll-like receptor 4 in inflammatory reactions of hippocampal neurons[J]. Yae Hu,Jiahui Mao,Yu Zhang,Ailing Zhou.  Neural Regeneration Research. 2013(16)
[3]大鼠海马神经元TLR4介导的MyD88依赖途径在神经炎症中的作用[J]. 张国霞,周爱玲,张贵萍,胡亚娥,茅家慧.  中国应用生理学杂志. 2013(01)
[4]Oxymatrine reduces neuroinflammation in rat brain A signaling pathway[J]. Jiahui Mao 1 , Yae Hu 1 , Ailing Zhou 1 , Bing Zheng 2 , Yi Liu 3 , Yueming Du 3 , Jia Li 3 , Jinyang Lu 3 , Pengcheng Zhou 3 1 Department of Pathophysiology, Medical School of Nantong University, Nantong 226001, Jiangsu Province, China 2 Department of Urology, the First People’s Hospital of Nantong, Nantong 226001, Jiangsu Province, China 3 Undergraduate of Medical School of Nantong University, Nantong 226001, Jiangsu Province, China.  Neural Regeneration Research. 2012(30)



本文编号：3170164