肺炎克雷伯菌调控肺泡Ⅱ型上皮细胞自噬的机制研究

发布时间：2021-05-11 13:47

　　目的探讨肺泡Ⅱ型上皮细胞自噬体与肺炎克雷伯菌相互作用的分子机制。方法建立体外肺炎克雷伯菌（K.pneumoniae）感染A549细胞模型,分为感染组（Pneu）、自噬抑制组（Pneu+3-MA）、自噬诱导组（Pneu+rapa）、阴性对照组（ctrl）,每组3个样本;通过免疫荧光染色与western-blot实验检测肺炎克雷伯菌不同时间点及不同浓度感染后细胞中自噬相关蛋白LC3Ⅱ的表达变化及分布情况;进一步采用自噬抑制剂3-Methyladenine （3-MA）与激动剂雷帕霉素（Rapamycin）干预细胞,观察K.pneumoniae感染A549细胞后自噬水平的变化。结果与未感染肺炎克雷伯菌的对照组相比,共聚焦显微镜观察感染组细胞LC3自噬体发生明显改变（P<0.05）,western-blot检测感染组细胞LC3Ⅱ蛋白表达上升（P<0.05）,且LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ升高（P<0.05）,表明肺炎克雷伯菌能够促进细胞自噬,随着细菌感染细胞比例（MOI）的增大,细胞自噬随之增多,随着时间的延长,肺炎克雷伯菌对细胞的入侵能力减弱（自噬增加）,LC3Ⅱ蛋白的表达逐渐增... 

【文章来源】：中华医院感染学杂志. 2019,29(11)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 菌株与细胞株
    1.2 试剂与仪器
    1.3 方法
        1.3.1 细菌计数
        1.3.2 细胞培养
        1.3.3 细胞感染模型建立
        1.3.4 共聚焦显微镜检测LC3自噬点变化
        1.3.5 western-blot检测自噬蛋白LC3Ⅱ表达水平
        1.3.6 自噬的诱导和抑制
    1.4 统计分析
2 结 果
    2.1 肺炎克雷伯菌感染后细胞形态学观察
    2.2 共聚焦显微镜观察肺炎克雷伯菌感染A549细胞LC3自噬点变化
    2.3 western-blot检测自噬蛋白LC3Ⅱ表达量
    2.4 自噬相关激动剂及抑制剂处理后对K.pneumoniae感染A549细胞自噬水平的影响
        2.4.1 免疫荧光结果
        2.4.2 western-blot检测结果
3 讨 论


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3181513