不同人源细胞对人细小病毒B19敏感性的鉴定

发布时间：2017-04-21 11:14

  本文关键词：不同人源细胞对人细小病毒B19敏感性的鉴定，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：人细小病毒B19(Human Parvovirus B19,简称B19病毒)是细小病毒科红病毒属的代表性病毒。B19病毒主要在公共场所通过呼吸道进行传播,患病人群具有广泛性,不同国家地区及种族的成人和儿童都有患病的报道。根据近年研究显示,B19病毒在临床上的疾病感染谱较为宽泛,并且胎肝、肾脏、胎盘血管内皮细胞等病灶都能在电镜下观察到B19病毒颗粒。B19病毒也能通过血液及血液代用品、母婴垂直感染等渠道进行传播。正因如此,B19病毒在近年受到了越来越多关注和研究。B19病毒主要是与细胞表面的红细胞糖苷脂(Gb4)结合,红细胞糖苷脂主要存在于骨髓的红系祖细胞表面。虽然B19病毒在临床上的疾病感染谱较为宽泛,但是依然没有找到能有效感染B19病毒的细胞系。现阶段还不能离体分离培养B19病毒,高载量的病毒还依赖于病料血浆/清等来源。目的:以半允许细胞UT-7/EPO作为参照,鉴定不同人源细胞系K562、HL-60、THP-1、Jukat、Huh715细胞对B19病毒的敏感性。方法:首先得到并培养了B19病毒的半允许细胞系UT-7/EPO细胞,调整了细胞状态、摸索了最适的培养条件。筛选了病毒载量大于107copies/mL的病料血浆并进行分型,选取了流行性最广泛的Ⅰ型病毒作为感染源。然后用病料血浆感染不同的人源细胞,并在2h、8h、16h、24h、32h、40h、2d、3d、4d、5d、6d分别取样提取细胞上清及细胞中的DNA、细胞中的RNA(反转为cDNA)进行定量PCR检测。最后根据定量PCR检测结果,对敏感性与半允许细胞UT-7/EPO细胞相当或是更好的细胞进行Western Blot及免疫荧光(IF)的检测。结果:通过感染细胞上清的检测,证明B19病毒能够吸附在半允许细胞UT-7/EPO的表面,其他的细胞的变化趋势不如UT-7/EPO细胞明显;细胞中DNA及RNA的检测表明,UT-7/EPO细胞对B19病毒有一定的敏感性但转录复制并不活跃,B19病毒未能进入到K562、HL-60、THP-1、Jukat、Huh715细胞;对UT-7/EPO细胞进行Western Blot及免疫荧光(IF)的检测显示,能产生一定量的蛋白外壳,但是并不能包装形成相应量的病毒子粒。结论:本研究明确了B19病毒半允许细胞UT-7/EPO感染B19病毒的体系以及该细胞感染效率和产生子代病毒子粒的情况。其他5种人源的白血病细胞及肝癌细胞对B19病毒的敏感性远不及UT-7/EPO细胞,说明B19病毒即使在人体内感染效率很高、有很宽泛的疾病感染谱,但是在离体繁殖的过程中受到很多因素的限制。探索并寻找对B19病毒的敏感细胞系将对研究B19病毒的在细胞内的复制周期、细胞内氧化应激及内质网应激、RNA转录图谱等的作用机制有很重要的意义。
【关键词】：人细小病毒B19 人源细胞 敏感性
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R373
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-8
• 前言8-9
• 第一篇 文献综述9-13
• 第一章 引言9
• 第二章 B19病毒的生物学特性及流行病学9-10
• 第三章 与B19病毒相关的疾病及检测10-11
• 第四章 B19病毒的体外培养及血液制品安全11-13
• 第二篇 研究内容13-42
• 第一章 半允许细胞UT-7/EPO的复壮13-22
• 1 材料和方法13-15
• 2 结果15-20
• 3 讨论20
• 4 小结20-22
• 第二章 不同人源细胞对人细小病毒B19敏感性的鉴定22-42
• 1 材料和方法22-31
• 2 结果31-39
• 3 讨论39-41
• 4 小结41-42
• 结论42-43
• 参考文献43-48
• 作者简介48-49
• 致谢49

【参考文献】

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1 成胜权,张国成,郑英文;人细小病毒B19感染与类风湿性关节炎相关性[J];第四军医大学学报;2001年13期

  本文关键词：不同人源细胞对人细小病毒B19敏感性的鉴定，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：320216