人乳铁蛋白（HLF）基因cDNA的细胞表达及精子介导转基因动物制备的研究

发布时间：2021-06-14 08:46

　　本研究将含有人乳铁蛋白（HLF）基因2366bp cDNA序列完整序列和800bp的奶山羊β-乳球蛋白基因5’端调控序列的乳腺特异表达重组载体pLNCXHLF按常规方法提取、纯化、PCR、酶切鉴定后，用于细胞表达和精子介导转基因动物的研究。 利用脂质体包裹重组质粒pLNCXHLF，导入到小鼠乳腺癌细胞株MA-782中，G418及PCR筛选获得阳性单克隆细胞。转染细胞利用海藻酸钠固定化包埋培养，同时加入激素诱导。诱导后，培养液上清通过Western-blotting分析证明，转染细胞表达并分泌出人乳铁蛋白，分子量为34KD；ELISA检测重组蛋白最高表达量为65mg／L培养基／10⁵细胞；抗菌实验表明，所获得的重组人乳铁蛋白具有抑制大肠杆菌生长的作用，而且比人乳铁蛋白标准品作用更强。 采用直接注射的方法，将脂质体包裹的含人乳铁蛋白基因的重组质粒pLNCXHLF注入兔睾丸组织和羊输精管中，进行转基因动物制备研究。所产F1代仔兔均为活体，经PCR和Southern检测，转基因阳性率相对较高（35％），而且雄体的这种能力保持的时间也很长（注射后七个月，仍可通过... 

【文章来源】：辽宁师范大学辽宁省

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

Fl/RlpCR系统表达载体pLNexHLF鉴定结果

750bP660bP图1一4菌落直接PCR鉴定结果Fig.l一4DireetPCRResultofexPressionveetorPLNCXHLFwithFI/RIsystem1:DL200OMarker2-5:表达载体pLNCXHLF1:DL2000MarkerZ一5:exPressionveetornallledPLNCXHLF1.2.4pLNcxHLF酶切鉴定结果图1一5表达载体pLNcxHLF在BamHIandHindln内切酶的作用下，被切成两段分别为3kb和6kb的带，见图1一5。表达载体pLNCXHLF结构见图1一1。14

IO0bP744bP图1一3FZ瓜ZPCR系统表达载体pLNCXHLF鉴定结果Fig，l一3ResultofexPressionveetorPLNCXHLFbyusingFZ/RZPCRsysteml:DLZOooMarkerZ一5:表达载体pLNCxHLF1:DLZOOOMarkerZ一5:exPressionveetornamedPLNCXHLF1.2.3菌落Fl瓜1系统直接PCR鉴定结果2345200ObP100750bP660bP图1一4菌落直接PCR鉴定结果Fig.l一4DireetPCRResultofexPressionveetorPLNCXHLFwithFI/RIsystem1:DL200OMarker2-5:表达载体pLNCXHLF1:DL2000MarkerZ一5:exPressionveetornallledPLNCXHLF1.2.4pLNcxHLF酶切鉴定结果图1一5表达载体pLNcxHLF在BamHIandHindln内切酶的作用下，被切成两段分别为3kb和6kb的带，见图1一5。表达载体pLNCXHLF结构见图1一1。14

【参考文献】：
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本文编号：3229476