重组铜绿假单胞菌外膜蛋白D的原核表达与多克隆抗体制备研究

发布时间：2021-06-18 16:52

　　为获得铜绿假单胞菌外膜蛋白OprD并研究其分子功能。本研究采用分子克隆构建OprD蛋白重组表达菌株,用正交试验设计方法获得OprD菌株的最优表达条件和培养条件,通过SDS-PAGE切胶的方法纯化OprD蛋白,小鼠免疫制备OprD多克隆抗血清,蛋白质印迹法检测抗血清的特异性。使用DNAMan和MEGA软件对OprD蛋白进行同源性和系统发生分析。结果表明,OprD重组载体双酶切、DNA测序鉴定结果、OprD蛋白表达与纯化条带大小分别与预测相符。正交试验获得OprD菌株的最优培养条件为:葡萄糖浓度为0,转速230r/min,装液量为50mL;最优表达条件为:菌液OD600=0.8时加入终浓度为0.3mmol/L的异丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）,37℃诱导12h。SDS-PAGE电泳切胶纯化获得纯度较高的OprD蛋白。蛋白质印迹法证实OprD蛋白抗血清具有较好的特异性。OprD蛋白序列系统发生分析发现,同菌属细菌存在较高的同源性,并且亲缘关系较近的细菌中OprD蛋白可能具有相似的分子功能。 

【文章来源】：河北农业大学学报. 2019,42(01)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试验材料
    1.2 重组质粒的构建
    1.3 OprD重组蛋白的表达鉴定及纯化
    1.4 OprD重组蛋白表达条件的优化
    1.5 多克隆抗体制备
    1.6 Western blotting
    1.7 OprD蛋白生物信息学分析
2 结果与分析
    2.1 OprD蛋白进化关系分析
    2.2 重组质粒的构建
    2.3 重组蛋白的表达检测与纯化
    2.4 OprD表达菌株最优培养条件的正交试验
    2.5 OprD表达菌株诱导条件的正交试验
    2.6 Western blotting
3 结论与讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]溶藻弧菌附着定植因子ACFA蛋白的原核表达、抗原性鉴定及生物信息学分析[J]. 刘祥.  西南农业学报. 2016(07)
[2]金属硫蛋白基因MT1A在大肠杆菌中的自诱导表达条件优化及其抗镉性[J]. 王昭,王席,杨威,彭冬,柳忠玉.  河南农业科学. 2016(05)
[3]溶藻弧菌外膜蛋白OmpU的克隆、表达条件优化及多克隆抗体制备[J]. 刘祥.  西南农业学报. 2016(03)
[4]重组铜绿假单胞菌外毒素A的原核表达和多克隆抗体制备及免疫保护功能分析[J]. 刘祥.  湖南农业大学学报(自然科学版). 2016(01)
[5]重组大肠埃希菌外膜蛋白OmpT的载体构建和表达条件优化及多克隆抗体制备[J]. 刘祥,俱雄,陈春琳.  湖南农业大学学报(自然科学版). 2015(04)
[6]艰难梭菌毒素B受体结合区CDB3融合蛋白诱导表达条件优化及其纯化[J]. 陈伟,刘文恩,李艳华,简子娟,罗姗,钟一鸣.  检验医学与临床. 2014(06)
[7]黄粉虫抗菌肽在大肠杆菌中表达条件优化及活性分析[J]. 热依汗古丽·阿里木,毛新芳,刘忠渊.  生物工程学报. 2013(06)
[8]汉防己甲素预防K562细胞获得性耐药机制的研究[J]. 朱小兰,许文林,吕旭晶,罗文娟,周磊磊,陈巧云.  中国实验血液学杂志. 2011(02)



本文编号：3237033