酵母双杂交技术筛选与eIF5A相互作用蛋白质及其功能研究

发布时间：2021-06-19 11:35

　　真核细胞起始因子5A（eukaryotic initiation factor 5A，eIF5A）是自然界中唯一含有特殊氨基酸hypusine的蛋白质，最初由于被发现参与了蛋白质的翻译启始过程而命名。事实上，eIF5A对于真核细胞大多数蛋白质的合成并非必需，而仅参与部分蛋白质的合成。随后的研究进一步发现，eIF5A还是HIV-1反式激活蛋白Rev发挥作用所必需的胞内协同因子，并参与mRNA的胞核外运，表明它还有其它的功能。 近年来研究进一步发现，eIF5A还与细胞凋亡的发生密切相关，但详细机制并不清楚。我们实验室在阻断泛素通路诱发白血病细胞凋亡的蛋白质组学研究中，发现eIF5A参与了上述凋亡调控，特别是抑制eIF5A的hypusine翻译后修饰能够诱发白血病细胞凋亡（靳宝锋等．Oncogene，2003，22：4819-4830）。本文为进一步揭示eIF5A在细胞凋亡过程中的作用，应用酵母双杂交技术对eIF5A相互作用蛋白质进行了筛选并对其功能进行了初步研究。 结果显示，我们首次发现并系统证明了eIF5A与syntenin之间能够发生特异性的相互作用，并具有重要的功能。在酵... 

【文章来源】：中国人民解放军军事科学院北京市

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

诱饵表达载体的酶切鉴定MDL2000..

Westernblot分析EFP、eifsa的表达

DBD一e1fsa细胞中自身转录激活活性的测定铿法，把pGBKT7一EFP、pGBKT7一eifsa以及空载胞AH109后，最终涂在两种氨基酸缺陷型(一TrP长。最终的分析结果是，无论是空载体、EFP还是激活活性。可以进行下一步的筛选工作(图略)。Gal的培养板上变蓝的菌落，视为阳性(图3)。以EFP为诱饵时，从1.75x106个的克隆中筛选性克隆;以eifsa为诱饵时，从1.Oxl06个的克隆中筛选性克隆;


本文编号：3237734