骨髓间充质干细胞来源的外泌体对成骨细胞增殖和分化的影响
发布时间：2021-08-18 14:47
目的:探讨骨髓间充质干细胞来源的外泌体对成骨细胞增殖和分化的影响。方法:体外分离培养骨髓间充质干细胞,超速离心法收集外泌体,并对成骨细胞进行刺激,细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）法检测骨髓间充质干细胞来源的外泌体对成骨细胞增殖的影响,碱性磷酸酶活性检测及茜素红染色观察骨髓间充质干细胞来源的外泌体对成骨细胞矿化的影响,利用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR）检测成骨相关基因的表达。结果:骨髓间充质干细胞来源的外泌体促进成骨细胞的增殖,上调成骨相关基因的表达,提升碱性磷酸酶活性及促进钙化结节的形成。结论:骨髓间充质干细胞来源的外泌体能够促进成骨细胞的增殖和分化。
【文章来源】：口腔医学研究. 2019,35(04)北大核心
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
图１骨髓间充质干细胞的分离培养Ｆｉｇ．１ＩｓｏｌａｔｉｏｎｏｆＢＭＳＣｓ．
提取的物质为囊泡状结构，粒径大小在１００ｎｍ以下，符合外泌体的基本特征（图３ａ）。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示ＢＭＳＣｓ细胞上清中提取的物质表达ＣＤ６３以及Ａｌｉｘ等外泌体表面标志物（图３ｂ）。１ａ：原代ＢＭＳＣｓ培养２４ｈ；１ｂ：原代ＢＭＳＣｓ培养７ｄ；１ｃ：原代ＢＭＳＣｓ培养１０ｄ图１骨髓间充质干细胞的分离培养Ｆｉｇ．１ＩｓｏｌａｔｉｏｎｏｆＢＭＳＣｓ．２ａ：茜素红染色；２ｂ：油红Ｏ染色图２ＢＭＳＣｓ的鉴定Ｆｉｇ．２ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＢＭＳＣｓ．３ａ：透射电镜（×５００００）；３ｂ：Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ图３ＢＭＳＣｓ来源外泌体的鉴定Ｆｉｇ．３ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＢＭＳＣｓｄｅｒｉｖｅｄｅｘｏｓｏｍｅ．２．３ＢＭＳＣｓ来源外泌体促进成骨细胞增殖为了检测ＢＭＳＣｓ来源的外泌体对成骨细胞增殖的影响，本文配置不同浓度的外泌体溶液，并绘制了５ｍｇ／Ｌ和１０ｍｇ／ＬＢＭＳＣｓ－ｅｘｏ刺激下成骨细胞的生长曲线。ＣＣＫ－８结果显示，加入ＢＭＳＣｓ－ｅｘｏ后，成骨细胞的增殖速度明显提高，而且ＢＭＳＣｓ－ｅｘｏ浓度越高，增殖越明显。上述结果证明ＢＭＳＣｓ－ｅｘｏ能够有效地促进成骨细胞的增殖（图４）。２．４ＢＭＳＣｓ来源外泌体促进成骨细胞的分化碱图４ＢＭＳＣｓ来源的外泌体对成骨细胞增殖的影响Ｆｉｇ．４ＥｆｆｅｃｔｏｆＢＭＳＣｓｄｅｒｉｖｅｄｅｘｏｓｏｍｅｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｏｓｔｅｏ－ｂｌａｓｔｓ．图５ＢＭ
ＭＳＣｓ细胞上清中提取的物质表达ＣＤ６３以及Ａｌｉｘ等外泌体表面标志物（图３ｂ）。１ａ：原代ＢＭＳＣｓ培养２４ｈ；１ｂ：原代ＢＭＳＣｓ培养７ｄ；１ｃ：原代ＢＭＳＣｓ培养１０ｄ图１骨髓间充质干细胞的分离培养Ｆｉｇ．１ＩｓｏｌａｔｉｏｎｏｆＢＭＳＣｓ．２ａ：茜素红染色；２ｂ：油红Ｏ染色图２ＢＭＳＣｓ的鉴定Ｆｉｇ．２ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＢＭＳＣｓ．３ａ：透射电镜（×５００００）；３ｂ：Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ图３ＢＭＳＣｓ来源外泌体的鉴定Ｆｉｇ．３ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＢＭＳＣｓｄｅｒｉｖｅｄｅｘｏｓｏｍｅ．２．３ＢＭＳＣｓ来源外泌体促进成骨细胞增殖为了检测ＢＭＳＣｓ来源的外泌体对成骨细胞增殖的影响，本文配置不同浓度的外泌体溶液，并绘制了５ｍｇ／Ｌ和１０ｍｇ／ＬＢＭＳＣｓ－ｅｘｏ刺激下成骨细胞的生长曲线。ＣＣＫ－８结果显示，加入ＢＭＳＣｓ－ｅｘｏ后，成骨细胞的增殖速度明显提高，而且ＢＭＳＣｓ－ｅｘｏ浓度越高，增殖越明显。上述结果证明ＢＭＳＣｓ－ｅｘｏ能够有效地促进成骨细胞的增殖（图４）。２．４ＢＭＳＣｓ来源外泌体促进成骨细胞的分化碱图４ＢＭＳＣｓ来源的外泌体对成骨细胞增殖的影响Ｆｉｇ．４ＥｆｆｅｃｔｏｆＢＭＳＣｓｄｅｒｉｖｅｄｅｘｏｓｏｍｅｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｏｓｔｅｏ－ｂｌａｓｔｓ．图５ＢＭＳＣｓ来源的外泌体对成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响Ｆｉｇ．５ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＢＭＳＣｓｄｅｒｉｖｅｄｅｘｏｓｏｍｅｏｎＡＬＰａｃｔｉｖｉｔ
【参考文献】：
期刊论文
[1]银杏叶提取物对成骨细胞分化的影响及相关机制研究[J]. 张晓晓,李婧,王俊妹,李彤,杨沫扬,吴哲. 口腔医学研究. 2017(05)
[2]骨髓间充质干细胞复合脱细胞软骨和富血小板血浆的体内成骨实验[J]. 冯晓珂,董岩,李治冶,吴炜,赵铱民. 实用口腔医学杂志. 2017(02)
[3]干细胞源外泌体治疗缺血性心脏病的近况[J]. 何尤夫,石蓓. 临床与病理杂志. 2017(02)
[4]骨髓间充质干细胞的旁分泌能影响成骨细胞生物学功能[J]. 李成,周海斌. 中国组织工程研究. 2014(10)
本文编号：3350089
【文章来源】：口腔医学研究. 2019,35(04)北大核心
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
图１骨髓间充质干细胞的分离培养Ｆｉｇ．１ＩｓｏｌａｔｉｏｎｏｆＢＭＳＣｓ．
提取的物质为囊泡状结构，粒径大小在１００ｎｍ以下，符合外泌体的基本特征（图３ａ）。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示ＢＭＳＣｓ细胞上清中提取的物质表达ＣＤ６３以及Ａｌｉｘ等外泌体表面标志物（图３ｂ）。１ａ：原代ＢＭＳＣｓ培养２４ｈ；１ｂ：原代ＢＭＳＣｓ培养７ｄ；１ｃ：原代ＢＭＳＣｓ培养１０ｄ图１骨髓间充质干细胞的分离培养Ｆｉｇ．１ＩｓｏｌａｔｉｏｎｏｆＢＭＳＣｓ．２ａ：茜素红染色；２ｂ：油红Ｏ染色图２ＢＭＳＣｓ的鉴定Ｆｉｇ．２ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＢＭＳＣｓ．３ａ：透射电镜（×５００００）；３ｂ：Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ图３ＢＭＳＣｓ来源外泌体的鉴定Ｆｉｇ．３ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＢＭＳＣｓｄｅｒｉｖｅｄｅｘｏｓｏｍｅ．２．３ＢＭＳＣｓ来源外泌体促进成骨细胞增殖为了检测ＢＭＳＣｓ来源的外泌体对成骨细胞增殖的影响，本文配置不同浓度的外泌体溶液，并绘制了５ｍｇ／Ｌ和１０ｍｇ／ＬＢＭＳＣｓ－ｅｘｏ刺激下成骨细胞的生长曲线。ＣＣＫ－８结果显示，加入ＢＭＳＣｓ－ｅｘｏ后，成骨细胞的增殖速度明显提高，而且ＢＭＳＣｓ－ｅｘｏ浓度越高，增殖越明显。上述结果证明ＢＭＳＣｓ－ｅｘｏ能够有效地促进成骨细胞的增殖（图４）。２．４ＢＭＳＣｓ来源外泌体促进成骨细胞的分化碱图４ＢＭＳＣｓ来源的外泌体对成骨细胞增殖的影响Ｆｉｇ．４ＥｆｆｅｃｔｏｆＢＭＳＣｓｄｅｒｉｖｅｄｅｘｏｓｏｍｅｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｏｓｔｅｏ－ｂｌａｓｔｓ．图５ＢＭ
ＭＳＣｓ细胞上清中提取的物质表达ＣＤ６３以及Ａｌｉｘ等外泌体表面标志物（图３ｂ）。１ａ：原代ＢＭＳＣｓ培养２４ｈ；１ｂ：原代ＢＭＳＣｓ培养７ｄ；１ｃ：原代ＢＭＳＣｓ培养１０ｄ图１骨髓间充质干细胞的分离培养Ｆｉｇ．１ＩｓｏｌａｔｉｏｎｏｆＢＭＳＣｓ．２ａ：茜素红染色；２ｂ：油红Ｏ染色图２ＢＭＳＣｓ的鉴定Ｆｉｇ．２ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＢＭＳＣｓ．３ａ：透射电镜（×５００００）；３ｂ：Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ图３ＢＭＳＣｓ来源外泌体的鉴定Ｆｉｇ．３ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＢＭＳＣｓｄｅｒｉｖｅｄｅｘｏｓｏｍｅ．２．３ＢＭＳＣｓ来源外泌体促进成骨细胞增殖为了检测ＢＭＳＣｓ来源的外泌体对成骨细胞增殖的影响，本文配置不同浓度的外泌体溶液，并绘制了５ｍｇ／Ｌ和１０ｍｇ／ＬＢＭＳＣｓ－ｅｘｏ刺激下成骨细胞的生长曲线。ＣＣＫ－８结果显示，加入ＢＭＳＣｓ－ｅｘｏ后，成骨细胞的增殖速度明显提高，而且ＢＭＳＣｓ－ｅｘｏ浓度越高，增殖越明显。上述结果证明ＢＭＳＣｓ－ｅｘｏ能够有效地促进成骨细胞的增殖（图４）。２．４ＢＭＳＣｓ来源外泌体促进成骨细胞的分化碱图４ＢＭＳＣｓ来源的外泌体对成骨细胞增殖的影响Ｆｉｇ．４ＥｆｆｅｃｔｏｆＢＭＳＣｓｄｅｒｉｖｅｄｅｘｏｓｏｍｅｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｏｓｔｅｏ－ｂｌａｓｔｓ．图５ＢＭＳＣｓ来源的外泌体对成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响Ｆｉｇ．５ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＢＭＳＣｓｄｅｒｉｖｅｄｅｘｏｓｏｍｅｏｎＡＬＰａｃｔｉｖｉｔ
【参考文献】：
期刊论文
[1]银杏叶提取物对成骨细胞分化的影响及相关机制研究[J]. 张晓晓,李婧,王俊妹,李彤,杨沫扬,吴哲. 口腔医学研究. 2017(05)
[2]骨髓间充质干细胞复合脱细胞软骨和富血小板血浆的体内成骨实验[J]. 冯晓珂,董岩,李治冶,吴炜,赵铱民. 实用口腔医学杂志. 2017(02)
[3]干细胞源外泌体治疗缺血性心脏病的近况[J]. 何尤夫,石蓓. 临床与病理杂志. 2017(02)
[4]骨髓间充质干细胞的旁分泌能影响成骨细胞生物学功能[J]. 李成,周海斌. 中国组织工程研究. 2014(10)
本文编号：3350089
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