重组轮状病毒疫苗VP8 * 蛋白与组织血型抗原的结合性研究

发布时间：2021-08-21 18:10

　　目的评价轮状病毒（Rotaviruses,RVs）疫苗株Rotarix和RotaTeq VP8^*蛋白与组织血型抗原（histo-blood group antigens,HBGAs）基因融合的免疫效果。方法从GenBank获取Rotarix和RotaTeq两种疫苗VP8^*蛋白基因序列,根据大肠埃希菌常用密码子进行序列优化后人工合成Rotarix和RotaTeqVP8^*蛋白基因并采用PCR扩增合成的两种基因,引物上、下游分别引入Nde I和Xho I限制性内切酶酶切位点。将PCR产物及载体pET-30a用Nde I和Xho I双酶切,经1.5%琼脂糖凝胶电泳回收目的片段后在T4连接酶作用下连接,连接产物转化至DH5α感受态细胞并进行PCR鉴定,取阳性菌液提取质粒,经Nde I和Xho I双酶切鉴定正确后测序。将合成的基因序列与表达载体pET-30a连接后导入大肠埃希菌BL21（DE3）,加入IPTG诱导表达,经Ni²⁺ beads亲和层析纯化得到VP8^*-His融合蛋白,进行SD... 

【文章来源】：中国病原生物学杂志. 2019,14(05)北大核心CSCD

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

图１纯化ＶＰ８＊－Ｈｉｓ融合蛋白鉴定Ｍ蛋白准品１ＲｏｔａＴｅｑＶＰ８＊－Ｈｉｓ融合蛋白２ＲｏｔａｒｉｘＶＰ８＊－Ｈｉｓ融合蛋白

ｒ１ＲｏｔａＴｅｑＶＰ８＊－ＨｉｓＦｕｓｉｏｎＰｒｏｔｅｉｎ２ＲｏｔａｒｉｘＶＰ８＊－ＨｉｓＦｕｓｉｏｎＰｒｏｔｅｉｎＦｉｇ．１ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｐｕｒｉｆｉｅｄＶＰ８＊－Ｈｉｓｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎ２ＶＰ８＊－Ｈｉｓ融合蛋白与寡糖的结合酶标法检测不同ＶＰ８＊－Ｈｉｓ融合蛋白与各型人工合成寡糖的结合性，结果见图２。Ｒｏｔａｒｉｘ和ＲｏｔａＴｅｑ－ＶＰ８＊融合蛋白均能与Ｈ１型寡糖结合，与其他几种寡糖结合较弱。图２ＶＰ８＊－Ｈｉｓ融合蛋白与寡糖的结合Ｆｉｇ．２ＴｈｅｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｂｉｎｄｉｎｇａｓｓａｙｏｆＶＰ８＊－Ｈｉｓｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎ３ＶＰ８＊－Ｈｉｓ融合蛋白与唾液的结合酶标法检测两个ＶＰ８＊－Ｈｉｓ融合蛋白与不同表型唾液标本的结合性，结果见图３和图４。ＲｏｔａＴｅｑ和ＲｏｔａｒｉｘＶＰ８＊－Ｈｉｓ融合蛋白均与分泌型唾液结合，而不与非分泌型唾液。ＡＡ型唾液ＡＢＡＢ型唾液ＢＢ型唾液ＯＯ型唾液Ｏ－Ｏ－型唾液图３ＲｏｔａＴｅｑＶＰ８＊－Ｈｉｓ融合蛋白与唾液的结合ＡＴｙｐｅＡｓａｌｉｖａＡＢＴｙｐｅＡＢｓａｌｉｖａＢＴｙｐｅＢｓａｌｉｖａＯＴｙｐｅＯｓａｌｉｖａＯ－ＴｙｐｅＯ－ｓａｌｉｖａＦｉｇ．３ＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｂｉｎｄｉｎｇｐａｔｔｅｒｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅＲｏｔａＴｅｑＶＰ８＊－ＨｉｓｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｔｈｅｓａｌｉｖａＡＡ型唾液ＡＢＡＢ型唾液ＢＢ型唾液ＯＯ

蛋白与寡糖的结合Ｆｉｇ．２ＴｈｅｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｂｉｎｄｉｎｇａｓｓａｙｏｆＶＰ８＊－Ｈｉｓｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎ３ＶＰ８＊－Ｈｉｓ融合蛋白与唾液的结合酶标法检测两个ＶＰ８＊－Ｈｉｓ融合蛋白与不同表型唾液标本的结合性，结果见图３和图４。ＲｏｔａＴｅｑ和ＲｏｔａｒｉｘＶＰ８＊－Ｈｉｓ融合蛋白均与分泌型唾液结合，而不与非分泌型唾液。ＡＡ型唾液ＡＢＡＢ型唾液ＢＢ型唾液ＯＯ型唾液Ｏ－Ｏ－型唾液图３ＲｏｔａＴｅｑＶＰ８＊－Ｈｉｓ融合蛋白与唾液的结合ＡＴｙｐｅＡｓａｌｉｖａＡＢＴｙｐｅＡＢｓａｌｉｖａＢＴｙｐｅＢｓａｌｉｖａＯＴｙｐｅＯｓａｌｉｖａＯ－ＴｙｐｅＯ－ｓａｌｉｖａＦｉｇ．３ＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｂｉｎｄｉｎｇｐａｔｔｅｒｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅＲｏｔａＴｅｑＶＰ８＊－ＨｉｓｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｔｈｅｓａｌｉｖａＡＡ型唾液ＡＢＡＢ型唾液ＢＢ型唾液ＯＯ型唾液Ｏ－Ｏ－型唾液图４ＲｏｔａｒｉｘＶＰ８＊－Ｈｉｓ融合蛋白与唾液的结合ＡＴｙｐｅＡｓａｌｉｖａＡＢＴｙｐｅＡＢｓａｌｉｖａＢＴｙｐｅＢｓａｌｉｖａＯＴｙｐｅＯｓａｌｉｖａＯ－ＴｙｐｅＯ－ｓａｌｉｖａＦｉｇ．４ＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｂｉｎｄｉｎｇｐａｔｔｅｒｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅＲｏｔａｒｉｘＶＰ８＊－Ｈｉｓｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｔｈｅｓａｌｉｖａ·７４５·中国病原生物学杂志ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰａｔｈｏｇｅｎＢｉｏｌｏｇｙ２０１９年


本文编号：3356088