TAT-Ag85B蛋白疫苗的优化及其免疫效应的研究

发布时间：2017-05-03 09:10

  本文关键词：TAT-Ag85B蛋白疫苗的优化及其免疫效应的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的 为获得大量目的蛋白,对pET28a-TAT-Ag85B质粒在E.coli BL21(DE3)中表达条件进行优化,并通过体内外实验观察表达蛋白的免疫作用,为结核病等疾病的防控提供依据。方法 1.将质粒pET28a-TAT-Ag85B转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,使用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导TAT-Ag85B融合蛋白表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PACGE)对表达产物进行鉴定分析。2.分别从诱导剂浓度、诱导温度和诱导时间三个方面对蛋白表达条件进行优化。3.使用His-tag离子亲和层析柱分离纯化融合蛋白,经SDS-PAGE电泳分析蛋白表达情况,并使用Western blot鉴定。3.分3次皮下注射免疫BALB/c小鼠,末次免疫2周后,ELISA法检测血清中抗Ag85B滴度,并分别取小鼠脾细胞与巨噬细胞,共培养后ELISA法检测培养液上清中细胞因子的浓度。结果 1.经酶切鉴定质粒转化成功,并且通过SDS-PAGE鉴定诱导后获得的蛋白为所需目的蛋白。2.通过对照试验得出使用lmmol/L IPTG在28℃条件下诱导8h是目的蛋白的最佳表达条件,并且获得了高表达的目的蛋白。3.经Vestern blot鉴定,获得的目的蛋白是所需蛋白TAT-Ag85B。4.ELISA法检测免疫小鼠血清中抗Ag85B抗体变化情况,发现TAT-Ag85B组IgG滴度显著增高。检测培养液上清中细胞因子IL-2的分泌情况,借此反应巨噬细胞抗原提呈能力,发现经TAT-Ag85B蛋白刺激的细胞抗原提呈能力增强。结论本实验对TAT-Ag85B融合蛋白的表达条件进行了一系列优化,获得了大量高纯度目的蛋白。为下一步体内外实验提供了物质基础。并且通过动物实验发现TAT-Ag85B融合蛋白具有增强巨噬细胞(M(?))抗原提呈能力的作用。因此,该蛋白对如结核病等免疫性疾病的防治有一定的疗效,这为进一步研究其在抗结核以及其他免疫性疾病药物提供了基础。
【关键词】：结核分枝杆菌 TAT-Ag85B 蛋白疫苗 优化 免疫效应
【学位授予单位】：安徽理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R392-3
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-11
• 插图或附表清单11-12
• 注释说明清单12-14
• 引言14-16
• 第一部分 TAT-Ag85B融合蛋白表达条件的优化16-33
• 1.1 材料16-20
• 1.2 方法20-27
• 1.3 结果27-32
• 1.4 讨论32-33
• 第二部分 TAT-Ag85B DNA疫苗的免疫效应33-40
• 2.1 材料33-34
• 2.2 方法34-37
• 2.3 结果37-38
• 2.4 讨论38-40
• 结论40-41
• 参考文献41-45
• 附录A pET-28a(+)质粒图谱45-46
• 附录B pET28a-TAT-Ag85B测序图46-48
• 后记或致谢48-49
• 作者简介及读研期间获奖情况49
• 在读期间参与撰写的文章49-50
• 在读期间参与的主要项目50

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 李武;邓光存;刘晓明;王玉炯;;结核分枝杆菌CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B抗原真核共表达载体的构建与表达[J];生物工程学报;2014年02期

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本文编号：342715