流感病毒感染下激活α7nAChR对IL-4诱导巨噬细胞M2型极化的影响

发布时间：2017-05-06 00:07

  本文关键词：流感病毒感染下激活α7nAChR对IL-4诱导巨噬细胞M2型极化的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景:巨噬细胞(MΦ)受到病原体及其LPS,IFN-γ等刺激,会产生M1型极化,参与炎症反应;在细胞因子如IL-4、IL-13等作用下,会产生M2型极化,参与炎症修复。迷走神经释放的乙酰胆碱可以通过α7 n ACh R减轻MΦ因LPS或细菌刺激引起炎症反应,但不调控M2型极化。流感病毒感染下,激活α7 n ACh R是否影响MΦM2极化未见报道。目的:激活α7 n ACh R是否影响流感病毒感染IL-4诱导的MΦM2极化及其分子机制。方法:α7 n ACh R特异性激动剂(GTS-21)预处理BMDM,然后感染流感病毒(PR8),6 h后接受IL-4刺激,24 h收取细胞,提取RNA和蛋白进行Q-PCR和免疫印迹实验,检测Arg 1的表达等。野生型、α7 n ACh R或Akt1敲除小鼠BMDM用来对实验结果进行证实。在体用PR8感染野生型和α7 n ACh R或Akt1敲除小鼠,感染后3、5天处死小鼠取BALF细胞和肺脏进行Arg 1等分子测定。结果:激活MΦα7 n ACh R能增强IL-4诱导Arg 1(M2型极化的标记分子)的表达但不影响参与M2型极化的转录因子水平,如p-STAT6。在野生型BMDM中,激活α7 n ACh R可以剂量依赖性地抑制Akt磷酸化。在α7 n ACh R敲除的BMDM中,激活α7 n ACh R不能促进IL-4诱导的Arg 1的表达。在Akt1敲除的BMDM中,激活α7 n ACh R促进IL-4诱导MΦ的M2型效率显著降低。α7 n ACh R敲除小鼠感染流感病毒较野生型小鼠肺匀浆Arg 1表达显著减少。Akt1敲除小鼠感染流感病毒后,肺匀浆和BALF细胞中的Arg 1表达也较野生型小鼠显著升高。结论:流感病毒感染下激活α7 n ACh R促进IL-4诱导BMDM的M2型极化。Akt及其磷酸化在BMDM的M2型极化中起着不同作用。
【关键词】：骨髓来源巨噬细胞 流感病毒 α7乙酰胆碱受体 胆碱能抗炎症通路 巨噬细胞M2极化 精氨酸酶1 Akt
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R392
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-9
• 一、引言9-11
• 1.1 MΦ来源9
• 1.2 MΦ极化和作用9-10
• 1.3 流感病毒与MΦ10
• 1.4 胆碱能抗炎症通路10-11
• 二、实验材料与方法11-23
• 2.1 主要仪器11
• 2.2 试剂列表11-12
• 2.3 流毒病毒扩增及PFU测定12-14
• 2.3.1 病毒鸡胚繁殖12-13
• 2.3.2 病毒滴度测定13-14
• 2.4 髓源MΦ诱导14-16
• 2.4.1 实验材料14
• 2.4.2 制备小鼠成纤维L929 细胞上清液14
• 2.4.3 小鼠骨髓细胞的分离和提取14-15
• 2.4.4 提取小鼠骨髓细胞时裂解红细胞15
• 2.4.5 小鼠BMDM诱导培养15-16
• 2.4.6 小鼠BMDM形态16
• 2.5 小鼠BMDM纯度分析16-17
• 2.6 GTS-21 刺激实验17-18
• 2.7 WESTERN BLOTTING18-19
• 2.8 抽提BMDM全RNA19
• 2.9 CDNA合成19-20
• 2.10 REAL-TIME PCR20-21
• 2.11 BMDM分泌TNF-Α 检测步骤21-22
• 2.12 统计分析方法22
• 2.13 动物实验伦理批准22-23
• 三、实验结果23-36
• 3.1 体外诱导骨髓来源MΦ的阳性率23-24
• 3.2 PR8 感染下，激活 Α7 NACHR对BMDM极化标志分子的影响24-25
• 3.3 BMDM感染PR8 条件下，，激活 Α7 NACHR对IL-4 诱导ARG1及其转录因子的影响25-26
• 3.4 感染PR8 条件下，激活 Α7 NACHR抑制BMDM分泌TNF-Α26-27
• 3.5 感染PR8 条件下，敲除 Α7 NACHR抑制IL-4 诱导BMDM的M2 极化27-28
• 3.6 敲除 Α7 NACHR对感染PR8 小鼠肺匀浆中ARG1的影响28-29
• 3.7 BMDM感染PR8 条件下，不同浓度的GTS-21 对IL-4 诱导ARG1的影响29-30
• 3.8 BMDM感染PR8 条件下，激活 Α7 NACHR对不同浓度IL-4 诱导ARG1的影响30-31
• 3.9 BMDM感染PR8 条件下，激活 Α7 NACHR抑制PR8 诱导的P-AKT31-32
• 3.10 敲除AKT1 对BMDM M2 极化的影响32-33
• 3.11 小鼠感染PR8 条件下，敲除AKT1 对其肺匀浆和BALF细胞ARG1的影响33-36
• 四、分析与讨论36-39
• 五、参考文献39-41
• 综述41-49
• 参考文献45-49
• 发表文章及个人简历49-50
• 缩略词表50-52
• 致谢52-53

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