Wistar大鼠颈动脉球囊损伤后再狭窄模型建立及载脂蛋白J与再狭窄的关系研究

发布时间：2017-05-09 18:13

  本文关键词：Wistar大鼠颈动脉球囊损伤后再狭窄模型建立及载脂蛋白J与再狭窄的关系研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:建立一个稳定可靠的再狭窄的大鼠动物模型,在此基础上观察载脂蛋白J(Apolipoprotein J,Apo J)在再狭窄中表达的变化,探讨Apo J与再狭窄的关系及其可能的作用机制。方法:Wistar大鼠40只,分为实验组20只,对照组20只。经锁骨下静脉注射肝素后,实验组用2F Fogarty球囊导管于右侧颈总动脉进行球囊拉伤,对照组做假手术。分别于术后第1、2、3、4周取静脉血并处死大鼠,取出右侧颈总动脉全段,取其中0.3cm包埋在10%中性福尔马林中以备病理检测,余下血管段在液氮中速冻,并转入-80℃冰箱,为生化检测备用。HE染色法观察右侧颈总动脉的形态学变化,免疫组化的方法检测Apo J蛋白在右侧颈总动脉中表达的部位及变化的趋势,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中Apo J的水平,real-time PCR的方法检测右侧颈总动脉中Apo J m RNA表达的水平。结果:①使用本造模方法实验组的大鼠存活17只,存活率85%,存活的大鼠右侧颈总动脉均可以观察到内膜的增生,造模成功。平均手术时间34.19±6.09分钟。②HE染色:颈动脉损伤后内膜出现明显增厚,增厚的程度随着时间逐渐加重。可见大量的血管平滑肌(VSMC)向内膜迁移,其增殖和迁移的活性较强。在术后第4周时管壁侧的VSMC增殖活性开始下降。测量内膜/中膜面积比(internal/medial,I/M)来表示内膜增厚的程度,对照组的I/M接近于0,术后实验组各时间点的I/M均大于对照组(P0.05),第4周的I/M(2.61±1.12)最大,与第1(0.63±0.04)、2周(1.08±0.29)相比有统计学差异(P0.05)。③免疫组化:实验组各时间点均可检测到Apo J蛋白,多表达于中膜及新生内膜的VSMC的胞浆中,实验组3周Apo J蛋白的表达最强,4周出现下降,对照组的血管全层未能检测到Apo J蛋白。④ELISA:对照组及实验组血清Apo J在手术前后均无显著差异。⑤real-time PCR:第1周时实验组Apo J m RNA水平与对照组之间没有统计学差异(P=0.254);第2周时实验组Apo J m RNA的表达显著高于对照组(7.58±1.91 vs 0.91±0.17,P=0.006);在第3周时实验组Apo J m RNA的表达达到高峰(8.49±2.24 vs 0.98±0.21,P=0.007);在第4周时实验组Apo J m RNA开始下降,但仍高于对照组(3.85±0.96 vs 1.05±0.35,P0.001)。结论:本研究所用的造模方法简单实用,可重复性强,大鼠存活率及成模率高。大鼠颈动脉球囊损伤后的内膜增生主要由VSMC向内膜迁移及增殖导致,新生内膜中VSMC增殖和迁移的活性较强,但在第4周下降。损伤血管中的Apo J m RNA及蛋白在损伤血管的VSMC中表达显著升高,均在第3周最高,第4周下降。提示Apo J与血管损伤及损伤后内膜增生密切相关。血管中高表达的Apo J主要来源于损伤组织局部的VSMC合成而非来源于系统表达,局部合成Apo J的量尚不足以引起全身血清的Apo J水平变化。我们推测可能作为一种损伤后的代偿,通过抑制VSMC的增殖和迁移的活性对再狭窄起保护作用。
【关键词】：再狭窄 载脂蛋白J丛生蛋白 冠心病 动物模型 血管平滑肌
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R541.4;R-332
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-11
• 前言11-13
• 研究现状、成果11-12
• 研究目的、方法12-13
• 一、Wistar大鼠颈动脉球囊损伤后再狭窄模型的建立13-28
• 1.1 对象和方法13-19
• 1.1.1 实验对象13
• 1.1.2 实验所需材料13-15
• 1.1.3 实验方法15-19
• 1.1.4 统计学方法19
• 1.2 结果19-23
• 1.2.1 建模存活率及成功率19-20
• 1.2.2 病理检查结果20-23
• 1.3 讨论23-26
• 1.4 小结26-28
• 二、载脂蛋白J与Wistar大鼠颈动脉球囊损伤后再狭窄的关系28-50
• 2.1 对象和方法28-40
• 2.1.1 实验对象28
• 2.1.2 实验所需材料28-30
• 2.1.3 实验方法30-39
• 2.1.4 统计学方法39-40
• 2.2 结果40-45
• 2.2.1 大鼠颈动脉球囊损伤术后血管的形态学变化40
• 2.2.2 组织中载脂蛋白J表达情况40-42
• 2.2.3 血清中载脂蛋白J水平的情况42
• 2.2.4 组织中载脂蛋白J mRNA表达情况42-45
• 2.3 讨论45-49
• 2.4 小结49-50
• 结论50-51
• 参考文献51-55
• 发表论文和参加科研情况说明55-56
• 综述 载脂蛋白J在心血管领域中研究的进展56-76
• 综述参考文献68-76
• 致谢76

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