慢性应激对大鼠海马胶质细胞的不对称性影响

发布时间：2017-05-10 00:11

  本文关键词：慢性应激对大鼠海马胶质细胞的不对称性影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：通过建立慢性不可预见温和应激大鼠模型，考察①慢性应激所致大鼠学习记忆行为损伤是否在移除应激源之后得到自然恢复；②慢性应激下海马胶质细胞中的GFAP和EAAT2蛋白表达是否会发生改变；③研究慢性应激条件下，胶质细胞中的GFAP和EAAT2蛋白在大鼠海马三个亚区的表达情况，确定慢性应激对海马的损伤是否存在靶点。④研究慢性应激对胶质细胞中的GFAP和EAAT2蛋白表达在大鼠海马是否存在不对称性影响，并证明以往我们在研究中所发现的，慢性应激对海马的损伤具有右侧偏侧化的特点。⑤研究大鼠海马中胶质细胞中的GFAP和EAAT2蛋白表达是否会随着应激源的去除而得到恢复，进一步探讨慢性应激造成的海马损伤的修复机制问题。 方法：将雄性Sprague-Dawley大鼠随机分配到对照组、应激组和恢复组，建立慢性不可预见性应激模型，恢复组大鼠移除应激源后给予5周的自然恢复时间。应激模型和恢复模型结束后进行行为测试，考察大鼠海马空间学习和记忆功能的变化，行为实验包括旷场实验、水迷宫实验和Y迷宫实验三部分。行为实验结束后对慢性应激组和对照组大鼠进行蛋白免疫印迹实验，，检测慢性应激后大鼠海马星形胶质细胞结构和功能相关蛋白（GFAP和EAAT2）的表达水平是否发生变化。随后对三组大鼠海马组织进行免疫组化实验，分别考察在海马三个亚区中慢性应激是否对星形胶质细胞具有不对称性作用，并进一步检测移除应激35天后这种改变是否得到逆转。 结果：①慢性应激导致海马空间记忆和行为功能受损，并在应激移除后得到一定程度的自然恢复，表现为水迷宫实验中恢复组大鼠在学习阶段逃离潜伏期显著地低于应激组和对照组(P0.01)，Y迷宫实验中应激组大鼠并未表现出对新异臂的偏好，恢复组与对照组均表现出新异臂穿梭次数百分比显著高于其他两臂（P0.05）；②大鼠海马星形胶质细胞中的GFAP和EAAT2两种蛋白在慢性应激中的表达发生改变，GFAP表达显著上调（P0.05），EAAT2表达出现下降（P0.05）；③在慢性应激后，海马不同亚区星形胶质细胞中GFAP和EAAT2两种蛋白表达水平在DG区变化不明显，在CA1和CA3区有明显改变，其中CA3区最为显著；④慢性应激过程中，大鼠海马星形胶质细胞中GFAP和EAAT2两种蛋白表达在CA1和CA3区存在不对称性，尤其以右侧改变明显；⑤移除应激源后自然恢复35天后，慢性应激导致的星形胶质细胞结构和功能的变化出现部分的恢复，但是并未完全达到正常水平。 结论：①大鼠对慢性应激导致海马空间记忆和行为受损具有一定的自我恢复能力。②星形胶质细胞中GFAP和EAAT2两种蛋白的改变是慢性应激导致记忆、行为损伤的重要作用机制之一。③大鼠海马的CA1和CA3区，尤其是CA3区，可能是慢性应激损伤的重要靶点。④慢性应激对海马星形胶质细胞的损伤存在右侧偏侧化的特点。⑤慢性应激一旦造成海马结构损伤，其修复速度比学习记忆行为等功能的恢复要慢，具体机制则需要进一步探讨。
【关键词】：慢行不可预见性温和应激 不对称性 星形胶质细胞 海马 恢复
【学位授予单位】：浙江理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R338
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-13
• 缩略语13-14
• 引言14-15
• 1 文献综述15-25
• 1.1 慢性应激15-17
• 1.1.1 应激与慢性应激15-16
• 1.1.2 抑郁与慢性应激16-17
• 1.2 脑不对称性17-18
• 1.3 海马18-20
• 1.3.1 海马与慢性应激18-19
• 1.3.2 海马的不对称性19-20
• 1.4 星形胶质细胞20-23
• 1.4.1 星形胶质细胞与慢性应激21-22
• 1.4.2 胶质细胞的主要相关蛋白22-23
• 1.5 慢性应激的恢复23-25
• 2 研究设计25-29
• 2.1 研究目的25
• 2.2 研究意义25-26
• 2.2.1 理论意义25-26
• 2.2.2 实践意义26
• 2.3 研究内容26-27
• 2.4 研究假设27
• 2.5 研究创新27
• 2.6 研究方法27-29
• 3 研究一：慢性应激对大鼠海马功能的影响29-42
• 3.1 材料和方法29-31
• 3.1.1 动物及分组29
• 3.1.2 慢性不可预见性温和应激模型29-30
• 3.1.3 设备及仪器30
• 3.1.4 药品及试剂30-31
• 3.2 动物行为实验31-32
• 3.2.1 旷场实验31
• 3.2.2 Morris 水迷宫实验31-32
• 3.2.3 Y 迷宫实验32
• 3.3 统计方法32-33
• 3.4 结果33-37
• 3.4.1 慢性应激对大鼠旷场实验的影响33-34
• 3.4.2 慢性应激对大鼠水迷宫实验的影响34-36
• 3.4.3 慢性应激对大鼠 Y 迷宫实验的影响36-37
• 3.5 讨论37-41
• 3.5.1 慢性不可预见性温和应激及恢复模型37-38
• 3.5.2 慢性应激及其恢复与大鼠空间认知能力38-41
• 3.6 小结41-42
• 4 研究二：慢性应激导致大鼠海马不同亚区中星形胶质细胞中 GFAP 和 EAAT2 蛋白表达水平的不对称性改变42-61
• 4.1 材料和方法42-46
• 4.1.1 动物及分组42
• 4.1.2 心脏灌注42
• 4.1.3 蛋白定量42
• 4.1.4 Western blot42-43
• 4.1.5 组织处理43
• 4.1.6 免疫组化43
• 4.1.7 仪器及设备43-44
• 4.1.8 药品及试剂44-46
• 4.1.9 图像采集46
• 4.1.10 统计方法46
• 4.2 结果46-57
• 4.2.1 蛋白免疫印迹结果46-48
• 4.2.2 免疫组化中蛋白表达的变化48-57
• 4.3 讨论57-61
• 4.3.1 慢性应激对胶质纤维酸性蛋白 GFAP 表达的影响57-59
• 4.3.2 兴奋性氨基酸转运蛋白 EAAT2 表达的影响59-60
• 4.3.3 小结60-61
• 5 总讨论61-63
• 6 结论与展望63-65
• 6.1 研究结论63
• 6.2 展望与不足63-65
• 参考文献65-77
• 附录一 Western blot77-78
• 附录二 组织处理78-79
• 附录三 免疫组化 EnVision 二步法79-80
• 致谢80

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 ;Expression of fibroblast growth factor-2 and fibroblast growth factor receptor-1 protein in the hippocampus in rats exhibiting chronic stress-induced depression[J];Neural Regeneration Research;2011年13期

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本文编号：353592