提高大鼠脂肪间充质干细胞转化为胰岛样细胞能力的实验研究

发布时间：2017-05-10 02:12

  本文关键词：提高大鼠脂肪间充质干细胞转化为胰岛样细胞能力的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:(1)大鼠脂肪间充质干细胞的分离、提取和培养。(2)探讨损伤胰腺提取液和细胞生长因子对脂肪间充质干细胞分化为胰岛样细胞的影响。方法:(1)无菌条件下通过手术获取大鼠脂肪组织,用胶原酶消化法获取脂肪间充质干细胞,并通过胰蛋白酶消化法传代细胞以达到纯化的目的。(2)按对照组、药物诱导组、混合诱导组和损伤胰腺提取液组的顺序进行分组,各组加入不同的细胞诱导因子和损伤胰腺提取液对细胞进行诱导11d,诱导完毕后,于倒置显微镜下观察细胞形态变化;用双硫腙(STZ)染色鉴定胰岛素阳性细胞;用酶联免疫吸附试验(ELISA)来比较高糖环境刺激前后各组胰岛素分泌量的多少;通过免疫荧光染色和荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)来检测相关基因的表达量。结果:(1)获取的大鼠脂肪间充质干细胞贴壁生长,原代细胞呈圆形;36-48h开始有梭形细胞贴壁或者成团的细胞集落形成;7-8天左右,原来成团聚集的细胞向外扩散生长,细胞之间的间隙逐渐缩小并相互融合,呈现旋涡状生长。约10天左右,瓶底细胞达到80%-90%融合。经过消化传代,细胞的纯度逐渐增高。(2)诱导组细胞形状变为圆形并聚集成团,出现DTZ染色阳性细胞;在高糖环境作用下分泌胰岛素且混合诱导组相比较于其余诱导组分泌量多;混合诱导组相关基因的表达量多于其余两组。对照组未出现上述变化。结论:(1)胶原酶消化法能够分离出大鼠脂肪间充质干细胞,通过胰蛋白酶消化法可以实现细胞的纯化。(2)损伤胰腺提取液对大鼠脂肪间充质干细胞分化为胰岛样细胞具有促进作用,可以提高脂肪间充质干细胞的转化能力。
【关键词】：脂肪间充质干细胞 损伤胰腺提取液 胰岛样细胞 胰岛素
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 摘要2-3
• Abstract3-6
• 第一部分 大鼠脂肪间充质干细胞的分离、培养6-18
• 引言6-7
• 1 材料和方法7-13
• 1.1 材料7
• 1.1.1 实验动物7
• 1.1.2 主要试剂和设备7
• 1.2 实验方法7-13
• 1.2.1 大鼠脂肪组织的获取7-8
• 1.2.2 原代大鼠脂肪间充质干细胞的分离培养8-10
• 1.2.3 细胞的传代和培养液的更换10-11
• 1.2.4 细胞的储存与复苏11-13
• 2 结果13-16
• 2.1 细胞的形态学特点13-16
• 3 结论16-17
• 4 参考文献17-18
• 第二部分 大鼠脂肪间充质干细胞诱导分化为胰岛素分泌细胞18-33
• 引言18-19
• 1 材料和方法19-25
• 1.1 材料19-20
• 1.1.1 实验动物19
• 1.1.2 主要试剂和设备19
• 1.1.3 实验相关液体的配制19-20
• 1.2 大鼠脂肪间充质干细胞的诱导分化20-24
• 1.2.1 大鼠糖尿病模型的制备20-21
• 1.2.2 损伤胰腺提取液的制备21
• 1.2.3 脂肪间充质干细胞的诱导分化21
• 1.2.4 胰岛素分泌细胞的鉴定21-24
• 1.3 统计学分析24-25
• 2 结果25-29
• 2.1 诱导后细胞的形态学特征25
• 2.2 DTZ染色25-26
• 2.3 葡萄糖刺激实验26
• 2.4 免疫荧光染色26-28
• 2.5 RT-PCR检测果28-29
• 3 讨论29-30
• 4 结论30-31
• 5 参考文献31-33
• 文献综述33-45
• 参考文献39-45
• 攻读硕士研究生期间的研究成果45-46
• 致谢46-47

【共引文献】

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1 刘子砚;邓华聪;;糖尿病及糖尿病前期与肝功能转氨酶相关性研究进展[J];贵州医药;2014年03期

2 高琳;叶山东;;糖尿病与恶性肿瘤[J];安徽医学;2014年10期

3 高春兰;姚旭;;2型糖尿病患者胰岛素注射模式的效果分析[J];当代护士(中旬刊);2014年11期

4 余宏伟;姜美君;宋俊红;张磊;董砚虎;;艾塞那肽对2型糖尿病患者血糖控制达标率的效果评价[J];成都医学院学报;2015年02期

5 陈晓铭;郑坤杰;吴美芬;方烁;胡卓清;李潍;刘美莲;武革;;罗格列酮对2型糖尿病大鼠胰腺PDX-1基因表达的影响[J];广东医学院学报;2015年02期

6 李伍娥;陈刚;温俊平;;脂联素对糖尿病肾病足细胞功能的影响及其机制研究综述[J];创伤与急诊电子杂志;2015年02期

7 赵芊;王博雅;江骥;胡蓓;;西格列汀在健康中国人体单次和多次给药的药代动力学[J];中国临床药理学杂志;2015年12期

8 刘文;刘晟;王维;刘华生;;对2型糖尿病患者相关脑损害的MRI研究进展[J];磁共振成像;2015年10期

9 何辉;李永健;谭雪莹;吴晓平;史光军;;损伤胰腺提取液对ASCs分化为胰岛样细胞影响[J];青岛大学医学院学报;2015年05期

10 崔佳;窦京涛;;糖尿病伴高血糖肾伤害的特征、识别与临床处理[J];实用糖尿病杂志;2013年04期

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 王霞;核因子E2相关因子2基因多态性与氧化应激及2型糖尿病易感性的关联研究[D];华中科技大学;2013年

2 梁丽娜;脾阴虚糖尿病认知功能障碍的发病机制及滋补脾阴方药的调控作用研究[D];大连医科大学;2012年

3 常晓慧;组分中药金智达对认知功能的改善及其相关机制的研究[D];大连医科大学;2012年

4 王沛坚;激活TRPV1上调UCP2防治糖脂代谢紊乱致动脉粥样病变的机制研究[D];第三军医大学;2013年

5 赵亚玲;妊娠期糖尿病对子代的远期影响研究[D];昆明医科大学;2013年

6 马晓丽;基于代谢组学技术的糖尿病特征代谢物及维医证型研究[D];新疆医科大学;2013年

7 林叶新;PPARs筛选模型的构建及抗糖尿病天然药物活性成分的筛选[D];重庆大学;2013年

8 杨帆;改良Roux-en-Y胃转流术对低BMI2型糖尿病疗效及机制研究:随访及PS法配对研究[D];第四军医大学;2013年

9 崔颖;广东省东莞市糖尿病视网膜病变流行病学研究[D];南方医科大学;2013年

10 夏珂;SREBP/DDAH/ADMA途径在高胰岛素血症所致血管内皮损伤中的作用[D];中南大学;2012年

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1 崔秀月;降香乙酸乙酯部分黄酮化学成分及抑制α-葡萄糖苷酶活性研究[D];吉林大学;2013年

2 杨瑞凤;活性维生素D_3对糖尿病大鼠肾组织BMP-7、TGF-β1表达的影响[D];郑州大学;2013年

3 高茜;茶多糖对db/db小鼠血糖及胰岛功能的影响[D];河北医科大学;2013年

4 叶敏;酰化表没食子儿茶酚没食子酸酯抗癌和降糖活性研究[D];西南大学;2013年

5 周姗;早发2型糖尿病临床特征及大血管病变相关因素分析[D];大连医科大学;2012年

6 翟仰魁;红景天苷对体外高糖缺氧环境下大鼠心肌微血管内皮细胞Flk-1/Akt/eNOS信号通路等影响的研究[D];北京协和医学院;2013年

7 路玉洁;Mibefradil对db/db鼠的降糖作用及其机制初步研究[D];第三军医大学;2013年

8 白雪凤;糖代谢紊乱与血清癌胚抗原的关系研究[D];福建医科大学;2013年

9 王钊;β-环糊精衍生物包合齐墩果酸的生物利用度研究[D];第四军医大学;2013年

10 王洪亮;脂肪干细胞对糖尿病兔种植体周围植骨及骨结合影响的实验研究[D];第四军医大学;2013年

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本文编号：353809