硫化氢通过上调SIRT1拮抗同型半胱氨酸诱导HT22细胞衰老

发布时间：2017-05-11 20:02

  本文关键词：硫化氢通过上调SIRT1拮抗同型半胱氨酸诱导HT22细胞衰老，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨硫化氢(Hydrogen sulfide,H2S)是否可以通过上调SIRT1拮抗同型半胱氨酸诱导HT22细胞衰老。方法:Cell counting Kit-8(CCK8)法检测细胞的活性;β-半乳糖苷酶染色法(Senescence Associated acidic-β-Galactosidase SA-β-Gal)、台盼蓝计数求细胞生长曲线及Western Blotting检测细胞衰老相关蛋白P16INK4a、P21CIPL蛋白的表达评价HT22细胞衰老;Western Blotting检测沉默信息调节因子1(Silent mating type information regulation homolog 1,SIRT1)蛋白的表达;罗丹明123(Rh123)染色荧光显微镜照相检测细胞线粒体膜电位;Annexin V/PI染色流式细胞仪和Hoechst33258染色检测细胞凋亡。结果:1.Hcy(2.5、5、10 mmol/L)处理HT22细胞48h后,SA-β-Gal阳性细胞明显增加,衰老负性调控蛋白P16INK4a、P21CIPL蛋白表达明显上调,细胞生长曲线明显呈下降趋势,表明Hcy能诱导HT22细胞衰老。2.Na HS(H2S供体,100、200、400μmol/L)可呈浓度依赖性地抑制Hcy(5 mmol/L,48 h)诱导HT22细胞SA-β-Gal染色阳性细胞增加,P16INK4a、P21CIPL蛋白表达上调及细胞生长曲线下降趋势,表明H2S可拮抗Hcy诱导HT22细胞衰老。3.Hcy(2.5、5、10mmol/L)处理HT22细胞48小时后,细胞SIRT1蛋白的表达呈浓度依赖性下调,表明Hcy可抑制HT22细胞SIRT1蛋白的表达。4.Na HS(100、200、400μmol/L,48h)可浓度依赖性地上调HT22细胞SIRT1蛋白的表达,而且可逆转Hcy(5 mmol/L)处理HT22细胞后SIRT1蛋白表达的下调作用,表明H2S可上调HT22细胞SIRT1的表达。5.SIRT1抑制剂Sirtinol(15μmol/L)可逆转Na HS(400μmol/L)对Hcy(5 mmol/L,48 h)增加HT22细胞中SA-β-Gal染色阳性细胞比例、上调衰老相关关键蛋白P16INK4a、P21CIPL蛋白表达以及促进细胞生长曲线下降趋势的阻断作用,表明SIRT1对H2S抑制Hcy诱导HT22细胞衰老具有介导作用。结论:H2S通过上调SIRT1拮抗Hcy诱导HT22细胞衰老。
【关键词】：硫化氢 同型半胱氨酸 细胞衰老 SIRT1
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R339.38
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 主要英文缩略语索引9-11
• 第一章 绪论11-15
• 第二章 材料和方法15-23
• 2.1 主要实验仪器15-16
• 2.2 主要实验试剂16-17
• 2.3 试剂的制备17-19
• 2.4 实验方法19-21
• 2.5 统计学处理21-23
• 第三章 实验结果23-29
• 3.1 Hcy诱导HT22细胞的衰老23-24
• 3.2 H_2S拮抗Hcy诱导HT22细胞衰老24-25
• 3.3 Hcy抑制HT22细胞SIRT1的表达25
• 3.4 H_2S上调HT22细胞SIRT1的表达25-26
• 3.5 SIRT1抑制剂(Sirtinol)阻止H2S抗Hcy诱导的HT22细胞衰老26-27
• 3.6 SIRT1抑制剂(Sirtinol)逆转H2S抗Hcy诱导HT22细胞凋亡27-29
• 第四章 讨论29-33
• 第五章 实验结论33-34
• 参考文献34-38
• 文献综述38-46
• 参考文献43-46
• 作者攻读学位期间的科研成果46-47
• 致谢47

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本文编号：357937