中性粒细胞胞外诱捕网生成和降解方法的建立和评价

发布时间：2017-07-28 19:24

  本文关键词：中性粒细胞胞外诱捕网生成和降解方法的建立和评价

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【摘要】：目的中性粒细胞胞外诱捕网(NET)是近年来新发现的与自身免疫性疾病和血栓形成有关的结构,本研究拟建立一种评价NET体外生成和降解的方法。方法通过Ficoll-Histopaque密度梯度离心法从健康人外周血分离中性粒细胞,利用佛波酯(PMA)诱导其产生NET,免疫荧光细胞化学染色和琼脂糖凝胶电泳验证NET的形成,PicoGreen dsDNA染色结合荧光强度进行定量分析,研究DNA酶(DNaseⅠ)和健康人血清对NET的降解。结果 Ficoll密度梯度离心法分离的中性粒细胞纯度达到95%。激光共聚焦显微成像显示NET网状结构主要由DNA和组蛋白组成,琼脂糖凝胶电泳显示NET的DNA条带大小超过10 000 bp。DNase和健康人血清均可降解体外诱导的NET,但程度不同。结论本实验成功建立了人NET体外诱导生成和降解的方法。
【作者单位】： 天津医科大学研究生院;天津市心血管重塑与靶器官损伤重点实验室 武警后勤学院附属平津医院心脏中心 心血管病研究所;武警后勤学院附属平津医院呼吸与重症医学科;
【关键词】： 中性粒细胞 中性粒细胞胞外诱捕网 佛波酯
【基金】：国家自然科学基金(81102088,81170238,81070121) 天津市自然科学基金(12JCYBJC16600,11JCYBJC12000,09ZCZDSF04200)
【分类号】：R392.1
【正文快照】： 中性粒细胞是机体防御病原体入侵的关键细胞,在固有免疫应答系统中起着至关重要的作用[1]。传统观点认为中性粒细胞主要通过吞噬和脱颗粒作用抵御病原微生物的入侵[2]。Brinkmann等[3]发现第3条途径,一种介于凋亡和坏死的新的细胞程序性死亡方式-中性粒细胞胞外诱捕网(neutrop

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本文编号：585669