乙型脑炎病毒非结构4A蛋白编码基因重组子的构建及表达

发布时间：2017-07-29 14:24

  本文关键词：乙型脑炎病毒非结构4A蛋白编码基因重组子的构建及表达

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【摘要】：目的构建流行性乙型脑炎病毒(JEV)非结构4A(NS4A)蛋白编码基因重组子并鉴定。方法以JEV SA14-14-2株Total RNA为模板,运用RT-PCR方法扩增JEV NS4A蛋白编码基因,克隆至pMD19-T Simple载体并测序。为便于分析JEV NS4A蛋白编码基因重组子在哺乳动物细胞中的表达,在JEV NS4A蛋白编码基因5'端附加FLAG序列,亚克隆至pcDNA3.1(+)载体中,构建重组子pJNS4A并作酶切及DNA测序分析;采用脂质体法将pJNS4A转染中华仓鼠卵巢(CHO)细胞,采用免疫荧光法检测转染的CHO细胞中JEV NS4A蛋白分布与表达。结果重组质粒pJNS4A经BamHⅠ/EcoRⅠ酶切释出的插入子在830bp左右,与JEV NS4A蛋白编码基因和FLAG基因序列之和(834bp)相一致。JEV NS4A蛋白编码基因重组质粒转染的CHO细胞可见绿色荧光标记,主要分布在胞膜。结论 pJNS4A构建成功,转染的CHO细胞可稳定表达JEV NS4A蛋白。
【作者单位】： 中国医科大学附属盛京医院感染科;
【关键词】： 脑炎病毒 日本 病毒蛋白质类 NSA蛋白 CHO细胞
【基金】：辽宁省教育厅基础研究计划资助项目(No.05L498) 辽宁省博士科研启动基金项目计划(No.20131147)
【分类号】：R373
【正文快照】： 流行性乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)由乙脑病毒(JEV)引起,目前尚无特效的治疗方法,研制基因工程疫苗是乙脑疫苗的发展方向。基于已明确的JEV各相关蛋白功能特点分析,与JE DNA疫苗研究有关的JEV基因组各区段的选取主要集中于prM、E以及NS1蛋白基因等,其中prM-E蛋白编码

【共引文献】

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1 翟永贞;周言;马力;冯国和;;壳聚糖-pJME/GM-CSF纳米DNA疫苗肌注BALB/c鼠诱导细胞免疫效应的研究[J];病毒学报;2014年04期

2 刘晓宇;姚立红;陈爱s，

本文编号：589600